本发明专利技术涉及一种用于蓝藻水华的复合型微生物絮凝剂的制备方法，包括：将沙雷细菌Serratia和芽孢杆菌Bacillus分别接入灭菌的营养肉汤培养基中进行培养，24小时后分别取1mL和的菌液接入灭菌的发酵培养基中进行发酵培养，培养72h后将该发酵液作为种子液，在培养温度为35℃、摇床转速为160rpm、培养基初始pH为8.0、种子液接种量为10ml/L的条件下进行复合培养72h后，将发酵液进行离心分离，取上清液即得复合型微生物絮凝剂。本发明专利技术简便快捷，成本低；制得的絮凝剂用量少，稳定性强，易于保存，可以有效的絮凝蓝藻水样，絮凝率可达92％，具有良好的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于复合型微生物絮凝剂的制备领域，特别涉及。
技术介绍
絮凝剂广泛应用与于污水处理、食品生产及生物发酵等工业领域，但目前广泛使用的无机和有机高分子絮凝剂的残留物通常会引起环境污染问题，甚至对人类具有致癌、 致畸等毒性作用，已被许多国家禁止或限量使用，因而需要开发高效、安全无毒、不污染环境的新型絮凝剂。生物絮凝剂主要是由微生物在特定培养条件下所分泌产生的具有絮凝活性的高分子生物聚合物，具有安全无毒、对环境友好等优点。目前，美国、英国、日本等国家对生物絮凝剂进行了研究，筛选出多种絮凝剂产生菌，并在絮凝条件、机理、产絮凝剂的基因控制、 絮凝剂的纯化、性质及应用方面进行了系列工作。微生物絮凝剂对不同的悬浮物有不同的絮凝作用，目前微生物絮凝剂用于对水体富营养化的研究较少。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供该方法简便快捷，成本低，沙雷细菌(Serratia)和芽孢杆菌(Bacillus)对一般的抗生素均无抗性，易于灭活，保证了使用的生态安全性；制得的絮凝剂用量少，稳定性强，易于保存，可以有效的絮凝蓝藻水样，絮凝率可达92%，具有良好的应用前景。本专利技术的，包括将沙雷细菌Serratia和芽孢杆菌Bacillus (市售)分别接入灭菌的营养肉汤培养基中进行培养，24小时后分别取ImL沙雷细菌和芽孢杆菌的菌液接入灭菌的发酵培养基中进行发酵培养，培养72h后将该发酵液作为种子液，在培养温度为35°C、摇床转速为 160rpm、培养基初始pH为8.0、种子液接种量为10ml/L的条件下进行复合培养72h后，将发酵液进行离心分离，取上清液即得复合型微生物絮凝剂。所述营养肉汤培养基的组成为蛋白胨10g，牛肉浸出粉4. Og，NaCl 5.0g，酵母浸出粉3. Og,蒸馏水IL ；pH为7. 0 7. 2。所述营养肉汤培养基于115°C灭菌30min。所述发酵培养基的组成为葡萄糖20g，K2HPO4 5g, KH2PO4 3g, NaCl 0. 3g，尿素 0. 3g，酵母膏 0. 6g，MgSO4 · 7H20 0. 5g，蒸馏水 IL ；pH 为 7. 5 8. 5。所述发酵培养基中葡萄糖于115°C灭菌30min，其它成分于121°C灭菌20min。沙雷细菌Serratia，菌落白色，圆形，凸面，菌落边缘整齐，周生鞭毛，运动，细胞为杆状，革兰氏反应呈阴性。芽孢杆菌Bacillus菌落黄色，圆形，凸面，菌落边缘整齐。革兰氏染色后用电子显微镜以及扫描电镜观察发现，菌株为杆状，革兰氏反应呈阳性，侧生鞭毛。有益效果(1)本专利技术简便快捷，成本低，沙雷细菌(Serratia)和芽孢杆菌(Bacillus)对一般的抗生素均无抗性，易于灭活，保证了使用的生态安全性；(2)制得的絮凝剂产量高，用量少，稳定性强，易于保存，能有效的利用于实际水样，可以有效的絮凝蓝藻水样，絮凝率可达92%，具有良好的应用前景。附图说明 图1(1)为沙雷细菌(Serratia)的扫描电镜，(2)为芽孢杆菌(Bacillus)的扫描电镜；图2为沙雷细菌(Serratia)和芽孢杆菌(Bacillus)在不同时间下的生长曲线；图3 (1)为不同培养温度对复合型微生物絮凝剂絮凝性的影响；(2)为不同摇床转速对复合型微生物絮凝剂絮凝性的影响；(3)为不同培养基初始PH对复合型微生物絮凝剂絮凝性的影响；(4)为不同菌液用量对复合型微生物絮凝剂絮凝性的影响；(5)为不同接种量对复合型微生物絮凝剂絮凝性的影响；(6)为不同1 % CaCl2溶液的投加量对复合型微生物絮凝剂絮凝性的影响；(7)为不同pH对复合型微生物絮凝剂絮凝性的影响；图4为复合型微生物絮凝剂在不同作用时间下对蓝藻水样的絮凝效果图。具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。实施例1絮凝性测定方法向150mL烧杯中加入0. 4g高岭土，加水80ml蒸馏水，调节pH 为4. 5，加入4mL的质量分数为1 % CaCl2溶液和1. 5mL复合菌群发酵液，然后加蒸馏水至 100mL。常温下用恒温磁力搅拌器在200r/min的条件下搅拌2min，常温下静置5min。吸取 50mL处的上清液，用紫外可见分光光度计(752型)在550nm的波长下测定光密度值ODi， 同时以2mL未接种的新鲜发酵培养基代替复合菌群发酵液，其它操作条件完全相同的实验作为对照，测得光密度值0队。絮凝率计算公式为絮凝率％ =⑴队-⑶丨)o/o OD0高效絮凝菌的筛选与鉴定(1)菌株从活性污泥中筛选，将分离获得的各菌株分别接入装有发酵培养基 (50mL)的锥形瓶(250mL)中，置于摇床中于30°C、150r/min培养64h，取上清液进行絮凝活性测试，接种菌落在超净工作台中进行；(2)微生物絮凝 剂产生菌的初筛在IOOmL小烧杯中加入0. 2g高岭土，40ml蒸馏水、2mll% CaClyK溶液、2ml菌体发酵上清液，然后加水至50mL，均摇后静止15min，同时以不加菌的培养基的高岭土悬浊液为对照或以高岭土悬浊液为对照，用分光光度计在550nm 处测上清液的吸光度；(3)微生物絮凝剂产生菌的复筛复筛要比初筛精确，具体过程如下将絮凝活性较好的菌株接种到盛有50mL培养基的250mL锥形瓶中，150r/min，30°C培养64h后测絮凝活性。最佳培养条件的摸索(1)在6个250ml锥形瓶中分别加入50ml发酵培养基，调节pH为7. 0，分别加入 ImL沙雷细菌Serratia和芽孢杆菌Bacillus的种子液。分别在20°C、25°C、30°C、35°C、 40°C，摇床转速均为150rpm的立式双层摇床中进行复合培养，得复合菌群XLl。72h后，分别取2ml发酵液上清液，测定其絮凝率；(2)分别取摇床转速为 l20rpm、140rpm、l60rpm、l80rpm、200rpm、22Orpm,在 35°C 下恒温培养72h，分别测定絮凝率；(3)调节培养基初始 pH 分别为 5. 0,5. 5,6. 0,6. 5,7. 0,7. 5,8. 0,8. 5,9. 0，接入复合菌群XLl，在35°C、160rpm下培养72h，测产生絮凝剂的絮凝率；(4)将培养基初始pH调为8. 0，接入复合菌群XLl在35°C、160rpm下培养72h。分别在IOOml高岭土悬浮液中加入0. 5mL、l. OmLU. 5mL、2. OmL,2. 5mL复合菌群XLl发酵液的上清液，测定各自絮凝率；(5)将培养基初始pH调为8. 0，分别在5个装有50mL发酵培养基的250mL锥形瓶中加入0. 5mL、l. OmLU. 5mL、2. OmL,2. 5mL复合菌群XLl的种子液，在35°C、160rpm下培养 72h后，各自取1. 5mL发酵液上清液，测定其絮凝率；(6)将复合菌群XLl在培养基初始pH为8. O、培养温度为35°C、摇床转速为 160rpm、接种量为Iml的条件下进行发酵培养72h后，分别取1. 5mL上清液，分别加入Om本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种用于蓝藻水华的复合型微生物絮凝剂的制备方法，包括：将沙雷细菌（Ｓｅｒｒａｔｉａ）和芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）分别接入灭菌的营养肉汤培养基中进行培养，２４小时后分别取１ｍＬ沙雷细菌和芽孢杆菌的菌液接入灭菌的发酵培养基中进行发酵培养，培养７２ｈ后将该发酵液作为种子液，在培养温度为３５℃、摇床转速为１６０ｒｐｍ、培养基初始ｐＨ为８．０、种子液接种量为１０ｍｌ／Ｌ的条件下进行复合培养７２ｈ后，将发酵液进行离心分离，取上清液即得复合型微生物絮凝剂。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：赵晓祥，夏莉莉，
申请(专利权)人：东华大学，
类型：发明
国别省市：31
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