本发明专利技术涉及亚硝酸钠氧化法测定直接胆红素的试剂，可有效解决线性范围宽、抗干扰性强、反应曲线规范、能迅速达到终点且测定的准确度和精密度高且能实际应用无污染环境的问题，方法是，试剂1是，将邻苯二甲酸钾钠10.2～30.6g、氢氧化钠1.8～2.6g、聚乙二醇辛基苯基醚0.10～1.0ml和盐酸羟胺0.5～1.5g混合在一起，加水至1000ml溶解拌匀，pH值为4.5～5.5；试剂2是，由亚硝酸钠0.32～0.96g、氢氧化钠0.05～0.15g、碳酸钠0.10～0.30g混合在一起，加水至1000ml溶解拌匀，pH值为11～13，本发明专利技术组方科学，易生产，性能稳定，成本低，无环境污染。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种测定血清、血浆或尿液中直接胆红素的试剂，特别是一种亚硝酸钠氧化法测定直接胆红素的试剂。
技术介绍
胆红素是临床上判定黄疸的重要依据，也是肝功能的重要指标。胆红素是人体内结合(直接)胆红素与非结合(间接)胆红素的总和。胆红素总量增高、间接胆红素增高表明溶血性贫血，血型不合输血，恶性疾病，新生儿黄疸等。胆红素总量增高、直接与间接胆红素均增高表明急性黄疸型肝炎，慢性活动性肝炎，胆硬变，中毒性肝炎等。胆红素总量增高、直接胆红素增高表明肝内及肝外阻塞性黄疸，胰头癌，毛细胆管型肝炎及其他胆汁瘀滞综合征等。因此，对人体的血清、血浆或尿液中直接胆红素的测定，是医学检验最常规的项目之一。测定直接胆红素的试剂目前主要有以下三种重氮法测定直接胆红素的试剂、酶法测定直接胆红素的试剂和化学氧化法测定直接胆红素的试剂。重氮法测定直接胆红素的试剂历史悠久，测值较准，其主要缺点即试剂稳定性差、反应特异性差等，虽经过了无数次的改良，至今仍无满意结果。酶法测定直接胆红素的试剂采用该试剂测定直接胆红素具有简单、特异的特点。 但由于酶法测定直接胆红素的试剂酶热稳定性差，保存时间短，价格过高，不利于推广应用。所以，目前虽然已能进入临床应用，但远非完善，还需继续研究。化学氧化法测定直接胆红素的试剂从上世纪九十年代起，化学氧化法中的钒酸氧化法测定直接胆红素的试剂开始在国外实际应用，从1998年起钒酸氧化法测定直接胆红素的试剂开始进入我国。与重氮法测定直接胆红素的试剂和酶法测定直接胆红素的试剂相比，钒酸氧化法测定直接胆红素的试剂逐步显示出测定直接胆红素时其操作简单方便、 试剂稳定、保存时间长(如双试剂型在室温下可以稳定一年，置于仪器的试剂仓中可以稳定一个月以上)以及价格低廉等优点。但该试剂测低值样本时，副反应较明显而影响结果； 在自动生化仪上测定时可严重干扰其它项目测定；有一定毒性，尤其是废弃物可能被还原成剧毒的偏钒酸盐而污染环境。因此，胆红素的测定试剂有待改进和创新。
技术实现思路
针对上述情况，为克服现有技术缺陷，本专利技术目的在于提供一种亚硝酸钠氧化法测定直接胆红素的试剂，可有效解决线性范围宽、抗干扰性强、反应曲线规范、能迅速达到终点且测定的准确度和精密度高且能实际应用无污染环境的亚硝酸钠氧化法测定直接胆红素的试剂的问题。本专利技术的解决技术方案是，该亚硝酸钠氧化法测定直接胆红素的试剂是由试剂1 和试剂2组成，其中试剂1是，每IOOOml的试剂1，由邻苯二甲酸钾钠10. 2 30. 6g、氢氧化钠1. 8 2. 6g、聚乙二醇辛基苯基醚(Triton Χ_100)0· 10 1. 0ml、盐酸羟胺0. 5 1. 5g和余量为水组成，其中，先将邻苯二甲酸钾钠、氢氧化钠、聚乙二醇辛基苯基醚和盐酸羟胺混合在一起，加水至IOOOml溶解拌勻，PH值为4. 5 5. 5 ；试剂2是，每IOOOml的试剂2，由亚硝酸钠0. 32 0. 96g、氢氧化钠0. 05 0. 15g、碳酸钠0. 10 0. 30g和余量为水组成， 其中，先将亚硝酸钠、氢氧化钠和碳酸钠混合在一起，加水至IOOOml溶解拌勻，PH值为11 13。在以上组分中，邻苯二甲酸钾钠与氢氧化钠在PH为4. 5 5. 5形成稳定的缓冲液，利于试剂中各种成分的分散稳定性。Triton X-100表面活性剂，是非水溶性间接胆红素的增溶剂，是反应的促进剂、润滑剂，它提高检测的灵敏度，促进样本中各种物质溶解，减少样本脂浊等对测定的影响。盐酸羟胺为抑制剂，可抑制间接胆红素被氧化，亚硝酸钠主要起氧化性的作用。用本专利技术的亚硝酸钠氧化法测定直接胆红素的试剂盒基于下列原理测定直接胆红素直接胆红素被亚硝酸钠氧化成胆绿素，而间接胆红素在抑制剂作用下不被氧化，直接胆红素(DBil)的减少引起在波长450nm处吸光度的下降，吸光度的减少和血清中的胆红素成正比，测定450nm下的吸光度的减少来计算血清中直接胆红素的含量。本专利技术组方科学，新颖独特，易生产，性能稳定，保存期长，成本低，无环境污染，是测定胆红素试剂上的创新。具体实施例方式以下结合具体情况和实施例对本专利技术的具体实施方式作详细说明。实施例1本专利技术在具体实施中，由试剂1和试剂2组成，其中试剂1是，由邻苯二甲酸钾钠 20. 4g、氢氧化钠2. 2g、聚乙二醇辛基苯基醚0. 25ml、盐酸羟胺1. 0g，加蒸馏水至IOOOml混勻组成，PH值为5. 0 ；试剂2是，由亚硝酸钠0. 51g、氢氧化钠0. lg、碳酸钠0. 2g，加蒸馏水至IOOOml混勻组成，PH值为12。用本实施例的亚硝酸钠氧化法测定直接胆红素的试剂基于下列原理测定直接胆红素直接胆红素被亚硝酸钠氧化成胆绿素，而间接胆红素在抑制剂作用下不被氧化，DBil 的减少引起在波长450nm处吸光度的下降，吸光度的减少和血清中的胆红素成正比，测定 450nm下的吸光度的减少来计算血清中直接胆红素的含量。温度37 °C ；比色杯光径1. Ocm波长450nm样品和标准品各10 μ 1 ；所说的样品为被测品，即血清、血浆或尿液，所说的标准品为具有溯源性的定值血清，以下同；试剂1(简称R1,以下同)240 μ 1 ；试剂2 (简称R2,以下同)60 μ 1样品加札混勻，370C孵育5min后读取吸光度A1 ；加入&混勻，37°C孵育5min后读取吸光度A2,前后吸光度差ΔΑ = A2-A10计算ΔΑ样品直接胆红素浓度(_ol/L)=标准品浓度X -ΔΑ标准所说的样品加入试剂1与加入试剂2后两次吸光度的差；ΔΑβ ι为标准品加入试剂1与加入试剂2后两次吸光度的差(以下同)。实施例2本专利技术还可是由试剂1和试剂2组成，其中试剂1是，由邻苯二甲酸钾钠10. 2g、氢氧化钠1. 8g、聚乙二醇辛基苯基醚0. 10ml、盐酸羟胺0. 5g，加蒸馏水至IOOOml混勻组成，PH 值为4. 5 ；试剂2是，由亚硝酸钠0. 32g、氢氧化钠0. 05g、碳酸钠0. 10g，加蒸馏水至IOOOml 混勻组成，PH值为11。本实施例2的试剂测定直接胆红素的方法同实施例1，不再重述。实施例3本专利技术由试剂1和试剂2组成，其中试剂1是，由邻苯二甲酸钾钠30. 6g、氢氧化钠2. 6g、聚乙二醇辛基苯基醚1. 0ml、盐酸羟胺1. 5g，加蒸馏水至IOOOml混勻组成，PH值为 5. 5 ；试剂2是，由亚硝酸钠0. 96g、氢氧化钠0. 15g、碳酸钠0. 30g，加蒸馏水至IOOOml混勻组成，PH值为13。本实施例3的试剂测定直接胆红素的方法同实施例1，不再重述。本专利技术试剂进行了性能检测，并与现有的钒酸氧化法测定直接胆红素的试剂进行临床样品对比试验，结果如下仪器HITICH7060全自动生化分析仪准确度试验取RANDOX质控品正常值和异常值，用本专利技术试剂进行测试，每个浓度样品重复测试3次。权利要求1.一种亚硝酸钠氧化法测定直接胆红素的试剂，其特征在于，由试剂1和试剂2组成， 其中试剂1是，每IOOOml的试剂1，由邻苯二甲酸钾钠10. 2 30. 6g、氢氧化钠1. 8 2. 6g、 聚乙二醇辛基苯基醚0. 10 1. 0ml、盐酸羟胺0. 5 1. 5g和余量为水组成，其中，先将邻苯二甲酸钾钠、氢氧化钠、聚乙二醇辛基本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种亚硝酸钠氧化法测定直接胆红素的试剂，其特征在于，由试剂１和试剂２组成，其中试剂１是，每１０００ｍｌ的试剂１，由邻苯二甲酸钾钠１０．２～３０．６ｇ、氢氧化钠１．８～２．６ｇ、聚乙二醇辛基苯基醚０．１０～１．０ｍｌ、盐酸羟胺０．５～１．５ｇ和余量为水组成，其中，先将邻苯二甲酸钾钠、氢氧化钠、聚乙二醇辛基苯基醚和盐酸羟胺混合在一起，加水至１０００ｍｌ溶解拌匀，ＰＨ值为４．５～５．５；试剂２是，每１０００ｍｌ的试剂２，由亚硝酸钠０．３２～０．９６ｇ、氢氧化钠０．０５～０．１５ｇ、碳酸钠０．１０～０．３０ｇ和余量为水组成，其中，先将亚硝酸钠、氢氧化钠和碳酸钠混合在一起，加水至１０００ｍｌ溶解拌匀，ＰＨ值为１１～１３。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：牛好伟，王玉金，王玉珠，边倩茹，李瑾，
申请(专利权)人：郑州兰森生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：41
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