基于磁原位扩增的电化学发光基因传感器检测食品致病菌的方法技术

技术编号:6782883 阅读:333 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术公开了基于磁原位扩增的电化学发光基因传感器检测食品致病菌的方法。首先根据食品致病菌的高保守性DNA序列作为检测目的片段,设计三条PCR引物,然后由引物1制备得到磁性引物,由引物2制备得到TBR引物,引物3为普通的PCR引物,当检测体系里存在目标基因片段时,随着PCR过程的进行,磁性引物会发生扩增,磁性粒子上便直接带有三联吡啶钌分子修饰的双链核酸产物。当没有目的基因片段存在下,磁性引物不会发生扩增,因而不会出现带有信号分子的产物。之后再通过磁分离和原位的电化学发光检测手段,此方法实现了快速,高灵敏,安全,特异的检测目的基因片段的目的,很适合在实际检测的过程中得到推广。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于电化学发光基因检测
,特别涉及一种。
技术介绍
食源性致病菌作为一个严重的公共卫生问题是影响食品安全的主要原因之一。它严重危害人们的生命健康并造成重大经济损失。据世界卫生组织2002年3月公布的信息表明,全球每年发生食源性疾病达到数十亿例,全球每年因食源性致病菌污染引起的腹泻而死亡的儿童约170万。我国每年报告的食源性疾病病例约2-4万人,但据专家估计这一数字尚不到实际数字10%。2008年的广东省卫生厅的数据也显示,省内食物中毒死亡人数为884人,其中细菌性污染引起的食物中毒死亡占60. 97%。我国的外贸出口也因为食品安全问题而面临严峻的外部环境。特别需要引起重视的是进口国,用贸易技术壁垒限制中国产品出口,保护其本国产业的趋势越来越明显。发展一种快速,灵敏,特异,安全的检测食源性致病菌的方法一直是研究的热点。综合传统的食源性的致病菌的检测方法,主要有基因检测方法,免疫学检测方法,涂平板检测法,以及电子显微镜观察法。相对于基因水平的检测方式,这些方法往往有着特异性不高,灵敏度低,耗时长,仪器昂贵的缺点。目前,常规的基因检测手段包括有聚合酶链式反应(PCR)-电本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于磁原位扩增的电化学发光基因传感器检测食品致病菌的方法,其特征在于包括以下步骤:(1)设计引物:根据食品致病菌的保守序列进行设计,每种食品致病菌的检测引物为3条,分别命名为引物1、引物2和引物3,其中:引物1的5’端修饰有功能基团和连接子,连接子为不影响PCR反应特异性的随机DNA序列;引物2的5’端修饰有功能基团;引物3为核苷酸序列,其与引物2预扩增得到的片段包含或相同于引物1与引物2扩增得到的片段;(2)制备磁性引物和TBR引物:引物1通过其功能基团与功能化的磁性粒子上的功能基团反应,得到磁性引物;引物2通过其功能基团与活化的三联吡啶钌进行反应,得到TBR引物;(3)PCR反应:...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:邢达朱啸
申请(专利权)人:华南师范大学
类型:发明
国别省市:81

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