黑青斑河鲀干扰素IFNγ1及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种黑青斑河鲀干扰素IFNγ1蛋白，其氨基酸序列如SEQIDNO:1所示，该蛋白编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示，编码基因的制备方法，是用引物序列SEQIDNO:4和SEQIDNO:5为引物克隆得到干扰素蛋白IFNγ1的编码基因；同时还公开了干扰素蛋白IFNγ1的制备方法，是将黑青斑河鲀IFNγ1的编码基因克隆至表达载体，得到重组表达质粒，转化大肠杆菌，培养转化的大肠杆菌，经诱导后收集菌体，纯化、酶切，得到黑青斑河鲀干扰素IFNγ1。本发明专利技术的黑青斑河鲀干扰素IFNγ1可以用于制备鱼类免疫调节添加剂或免疫佐剂，具有诱导鱼类免疫基因表达的作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程
，具体涉及一种黑青斑河飩II型干扰素IFNy 1的编码基因、蛋白及其制备方法和应用。
技术介绍
细胞免疫因子Y干扰素(IFN Y)，作为干扰素系统中重要的II型IFN，是主要的巨噬细胞刺激因子和调控免疫反应的关键信号分子，能激活效应细胞，提高自然杀伤细胞 (NK)和巨噬细胞活性，促进免疫球蛋白的转换，具有抗肿瘤、抗病毒、调节和增强机体免疫功能等作用。干扰素IFNyI和IFNY2基因是鱼类IFNY基因的两个亚型，其氨基酸序列的特征是含有两个保守结构，包括氨基酸序列中的6个α-螺旋和在靠近其氨基酸序列C 端的F螺旋中均存在[IV]-Q-X-[KQ]-A-X2-E-[LF]-X2-[IV]这个保守结构，这与已研究过的其他区中的IFNy 二级结构类似。IFNY具有广泛的生物学活性。目前已知干扰素作为细胞因子的重要类型，是细胞和机体受到病毒感染或受核酸、细菌内毒素等诱导时，由受体细胞分泌的一种具有广谱抗病毒活性的糖蛋白，能诱导细胞进入抗病毒状态。IFNy是由Thl细胞产生的细胞因子。 它主要通过与其受体结合，活化JAK-STAT信号通路，激活下游基因的转录，包括本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种黑青斑河鲀干扰素ＩＦＮγ１，其氨基酸序列如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１所示。

【技术特征摘要】
1.一种黑青斑河飩干扰素IFNY 1，其氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所示。2.权利要求1所述黑青斑河飩干扰素IFNy1的编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID N0:2所示。3.权利要求2所述黑青斑河飩干扰素IFNγ 1的编码基因的制备方法，其特征在于以黑青斑河飩总mRNA为模板，以RNA Oligo dT，其序列如SEQ ID NO:3为引物，进行反转录，得到cDNA ；再以cDNA为模板，设计上游引物SEQ ID N0:4，下游引物SEQ ID N0:5，进行PCR， 得到权利要求2所述黑青斑河飩干扰素IFN γ 1的编码基因。4.权利要求1所述黑青斑河飩干扰素IFNYl的制备方法，是将黑青斑河飩干扰素 IFNyl的编码基因克隆至表达载体，得到重组表达质粒，转化至大肠杆菌，培养转化的大肠杆菌，经诱导后收集菌体，纯化、酶切，得到黑青斑河飩干扰素IFNy 1。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述表达载体为大肠杆菌表达载体 pET32a，重组表达质粒的构建包括以下步骤以含黑青斑河飩干扰素IFNy 1编码基因的质粒为模板，设计上游引物SEQ ID N0:6，下游引物SEQ ID...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢丹琪，张旭，贝锦新，陈洁琳，易诗白，冷婷婷，林浩然，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：81