一种预防或治疗帕金森病、抑郁症以及用于戒毒治疗的基因药物制造技术

一种预防或治疗帕金森病、抑郁症以及用于戒毒治疗的基因药物，是含有抗单胺氧化酶Ｂ的基因药物，药物中含有序列表中ＳＥＱ　　ＩＤ　　№：１－２０的ＲＮＡ或ＤＮＡ序列，而且序列表中的互补序列成对出现。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种基因药物，尤其是利用RNA干扰技术制备的一种预防或治疗帕金森病、抑郁症以及用于戒毒治疗的基因药物。
技术介绍
目前，单胺氧化酶B(Monoamine Oxidase B，MAOB)能代谢多巴胺并与神经退行性疾病帕金森氏症有关(Weinshilboum，R.M.Biochemical genetics ofcatecholamines in humans.Mayo Clin.Proc.58319-330，1983；Wu，R.M.；Cheng，C.W.；Chen，K.H.；Lu，S.L.；Shan，D.E.；Ho，Y.F.；Chern，H.D.The COMT L allele modifies the association between MAOB polymorphismand PD in Taiwanese.Neurology 56375-382，2001)，通过抑制MAOB可以减轻帕金森氏症的发展。应用左旋多巴治疗帕金森症时，同时使用单胺氧化酶B抑制剂可选择性阻滞细胞内多巴胺降解，从而增强疗效，减轻消逝现象和剂末运动不能症等不良反应。单胺氧化酶B抑制剂在临床上还被用来治疗抑郁症和进行戒毒治疗(《神经科学原理》韩济生主编，北京医科大学出版社，1993年)，但长期使用单胺氧化酶B抑制剂能产生严重的毒副作用(《临床精神药理学》王祖訢等主编，北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1990年；《临床药理学》徐叔云主编，人民卫生出版，1989年)。因此，寻找一种具有特异性并且毒副作用小的单胺氧化酶B抑制剂，既能够治疗相关疾病，又不会因治疗而产生副作用，是研究人员一直追求的目标。RNA干扰技术，是近年来生物学领域中出现的一门新兴技术，它的出现为整个生物医学领域带来了一场新的变革。利用长度为19-21bp的双链RNA(dsRNA)，可以选择性降解与其序列同源的mRNA，从而达到定向静默特定基因表达的作用，近来被广泛用于特定基因表达的功能研究(Sui G，Soohoo C，Affar EB，Gay F，Shi Y，ForresterWC，and Shi Y(2002)A DNA vector-based RNAi technology to suppress geneexpression in mammalian cells.Proc Natl Acad Sci USA 99(8)5515-5520；MatzkeM.Matzke A J，Kooter J M，RNAguiding gene siliencing.Science，2001，293(5532)1080-1083)。这种特异性基因静默技术作为某些特殊疾病的新型治疗手段，具有广阔的应用前景。由于RNA干扰技术使用RNA作为药物，药物很容易被细胞分解代谢而没有任何毒副作用，使用安全可靠。并且目前合成dsRNA化学方法或生物方法都已经十分成熟，整个合成过程周期短，产品质量稳定。专利技术创造内容本专利技术的目的是提供一种预防或治疗帕金森病、抑郁症以及用于戒毒治疗的基因药物。本专利技术药物为一种含有抗单胺氧化酶B的基因药物，含有序列表中SEQ ID №1-20RNA或DNA序列，而且序列表中的互补序列成对出现。其中，所述药物为含有抗单胺氧化酶B的siRNA药物(Anti-MAOB siRNAs)，含有序列表中SEQ ID №1-10的RNA序列。其中，所述药物为含有抗单胺氧化酶B的RNAi(interfering RNA)药物，含有序列表中SEQ ID №11-20的DNA序列。本专利技术的第二个目的是提供预防或治疗帕金森病、抑郁症以及用于戒毒治疗的基因药物的制备方法。本专利技术药物的制备方法包括以下步骤合成抗单胺氧化酶B基因的单链RNA序列(见序列表中SEQ ID №1-10)，混合等摩尔数的互补RNA序列，退火，修饰，制备互补双链RNA，得到siRNA基因药物。其中，单胺氧化酶B基因的mRNA序列是根据NCBI(National Center forBiotechnology，美国生物信息中心)在GenBank中公开的序列(序列号为NM 000898)而得。本专利技术药物的另一制备方法包括以下步骤合成抗单胺氧化酶B基因的单链DNA序列(见序列表中SEQ ID №11-20)，混合等摩尔数的互补DNA序列，退火，制备而得双链DNA；双链DNA装载入质粒，接种，克隆，得到RNAi基因药物。制备本专利技术药物时也可以加入培养基、脂质体等，经过混合处理，包装而成。本专利技术的第三个目的是提供一种预防或治疗帕金森病、抑郁症以及进行戒毒的方法，包括施用有效剂量的本专利技术药物。本专利技术药物可以制备成针剂、片剂或胶囊的形式。本专利技术药物预防或治疗相关疾病的效果，即抗单胺氧化酶B基因的效果，可以通过向靶细胞中介入特异siRNA片段(经脂质体包装有混合处理)或转染特异性RNAi质粒(经混合处理)，使细胞内含有效量的siRNA，从而达到抑制单胺氧化酶B基因的mRNA的目的。用PCR方法测定单胺氧化酶B基因mRNA的表达量鉴定抑制效果，从而选择出最佳剂量和用药方案；也可以进行相关的动物试验，将动物制作成帕金森病模型，然后注射或服用本专利技术药物，进行相关治疗。本专利技术药物中含有特异性siRNA，是专门针对单胺氧化酶B基因组保守序列而设计的，从而降解单胺氧化酶B基因的mRNA。设计并制备含特异RNAi的质粒，并将此质粒转入选定的靶细胞进行抗单胺氧化酶B基因的治疗。本专利技术具有如下的技术优势1、本专利技术提供的siRNA药物，含有抗单胺氧化酶B基因，因此，具有高效、安全和可靠性，可以快速投入临床应用。2、本专利技术提供的RNAi药物，利用质粒携带抗单胺氧化酶B基因的全部mRNA序列，该基因药物具有高效特异静默基因，具有安全可靠的特性，而且价格便宜、应用性强。3、目前对单胺氧化酶B的研究多注重该酶的化学抑制，而很少从基因静默的角度考虑，而且由于化学药物的毒副作用和非特异性作用限制了其应用。本专利技术基因药物通过特异性抑制单胺氧化酶B基因的转录和复制途径，阻断因氧化引起的细胞毒作用，最大程度地减少相关病人治疗后的不良症状，为人类预防或治疗帕金森病、抑郁症以及进行戒毒治疗提供安全、有效、便宜的药物。因此，本专利技术药物在临床应用中具有重要价值和应用前景。附图说明图1为MAOB mRNA表达的RT-PCR电泳图谱图2为电泳图谱的灰度扫描分析结果柱形图，纵坐标为MAOB/GAPDH比值。具体实施例方式实施例1.抗单胺氧化酶B的siRNA药物的制备根据NCBI在GenBank提供的单胺氧化酶B的序列(在GenBank中公开的序列号为NM_000898)，合成抗单胺氧化酶B的全部mRNA的单链RNA片段(见序列表中SEQ ID №1-10)，混合等摩尔数的单链RNA，进行加热，5分钟内加热到95℃，然后慢慢退火，1℃/30sec，直到35℃，然后，1℃/min，直到5℃，按照通常方法进行修饰后，制备互补双链RNA，得到siRNA药物。实施例2.抗单胺氧化酶B的RNAi药物的制备合成抗单胺氧化酶B基因的单链DNA序列(见序列表中SEQ ID №11-20)，混合等摩尔数的互补DNA序列，退火，制备而得双链DNA；双链DNA装本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：扈启宽，沈丽，陆爱丽，
申请(专利权)人：沈丽，
类型：发明
国别省市：