一种肺癌ＤＮＡ质粒疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种肺癌ＤＮＡ质粒疫苗，包括质粒载体，质粒载体中含有肺癌抗原ＭＡＧＥ－３和ＮＹ－ＥＳＯ－１的四表位的融合基因ＭＡＧＥ－ＮＹ－ＥＳＯ，融合基因ＭＡＧＥ－ＮＹ－ＥＳＯ具有ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．１所示的核苷酸序列；本发明专利技术还公开了该ＤＮＡ质粒疫苗的制备方法；以含有目标抗原编码序列的ＤＮＡ质粒作为新一代治疗性疫苗，该疫苗在体内诱导产生特异性针对相关编码抗原的免疫反应，并有效抑制肺癌发展和转移。因此本发明专利技术是一种制备简单、成本低廉且安全可靠、治疗肺癌有效的ＤＮＡ质粒疫苗。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及DNA疫苗，具体涉及一种肺癌DNA质粒疫苗及其制备方法。
技术介绍
肺癌是当前世界各地最常见的恶性肿瘤之一，近数十年肺癌的发病率和死亡率显著 增高，且上升趋势位列各种恶性肿瘤首位。肺癌的治疗效果在过去十年中没有显著的提 高，其主要原因是肺癌生物学特性十分复杂，恶性程度高，大部分患者在确诊时已属晚 期。癌症治疗理想的方法应能特异地清除癌变组织，而不破坏正常的组织。目前癌症的 三大常规疗法为手术、化疗和放疗，它们治疗癌症的特异性不足，常常对正常组织和器 官造成损伤。疫苗的免疫治疗可以产生针对癌症的特异性反应，甚至能清除残余的肿瘤 病灶，并产生免疫记忆，它与三大常规疗法有明显的互补性。疫苗通常用来预防致病微生物的侵害，癌症疫苗则主要是治疗性疫苗，是主动免疫 治疗的一种方式。随着癌症DNA疫苗对癌症防治效果的逐渐显现，已逐步引起人们的 重视。治疗性癌症DNA疫苗是近年来兴起的一种癌症防治方法，目的基因包括可编 码肿瘤相关抗原、肿瘤癌胚抗原、细胞因子和共刺激分子等的各种基因。大量研究表明， 通过肌肉注射编码抗原的质粒DNA，能诱导抗体产生、T细胞增殖、淋巴因子的释放及 细胞毒T细胞的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肺癌ＤＮＡ质粒疫苗，包括质粒载体，其特征在于所述质粒载体中含有肺癌抗原ＭＡＧＥ－３和ＮＹ－ＥＳＯ－１的四表位的融合基因ＭＡＧＥ－ＮＹ－ＥＳＯ，所述融合基因ＭＡＧＥ－ＮＹ－ＥＳＯ具有ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．１所示的核苷酸序列。

【技术特征摘要】
1、一种肺癌DNA质粒疫苗，包括质粒载体，其特征在于所述质粒载体中含有肺癌抗原MAGE-3和NY-ESO-1的四表位的融合基因MAGE-NY-ESO，所述融合基因MAGE-NY-ESO具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。2、 如权利要求1所述的一种肺癌DNA质粒疫苗，其特征在于所述质粒载体中还含 有GM-CSF (Genebankno. AAA52578)对应的全部基因序列。3、 如权利要求1或2所述的一种肺癌DNA质粒疫苗，其特征在于所述质粒载体为 pNGVL4a。4、 如权利要求1所述的一种肺癌DNA质粒疫苗，其特征在于所述融合基因 MAGE-NY-ESO表达的蛋白质具有SEQ ID N0.2所示的氨基酸序列。5、 一种权利要求1所述的肺癌DNA质粒疫苗的制备方法，其特征在于包括下述步骤1) 根据特异性CTL识别的肺癌抗原MAGE-3的表位EVDPIGHLY和FLWGPRALY 以及NY-ESO-l的表位SLLMWITQC和QLSLLMWIT，设计合成含有上述四个表位的 融合基因MAGE-NY-ESO，并以柔性四肽(GPGP)连接各表位，融合基因MAGE-NY-ESO 的大小为144bp;2) 以pNGVL4a质粒为载体，将上述融合基因MAGE-NY-ESO亚克隆入CMV启 动子下游，得到pNGVL-MAGE-NY-ESO质粒；3) 将上述pNGVL- MAGE-NY-ESO质粒转入感受态细胞￡.co TGI中，在37。C温 度条件下的LB培养基中培养扩增，经过筛选和质粒抽提试剂盒抽提获得DNA质粒疫 苗pNGVL- MAGE-NY-ESO 。6、 如权利要求5所述的一种肺癌DNA质粒疫...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚朝辉，乐燕萍，龙香娥，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：97[中国|宁波]