【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于减少RNAi中的脱靶表型效应的s i RNA的不依赖于序列 的修饰形式和其稳定形式领域本教导总地来说涉及用于减少RNA干扰中不依赖于序列的脱靶表型效应 (off-target phenotypic effect)的组合物、方法和试剂盒。引言短干扰RNA (siRNA)有效地诱导互补mRNA的切割，从而使mRNA无功能，且在细胞 中导致功能性蛋白质的丧失。此类分子借以发挥作用的机制已得到部分表征。简而言之， siRNA的2条RNA链中的一条被整合入称为RISC的酶复合物中，然后该复合物能够结合并 且切割含有互补序列的mRNA，从而消除成熟mRNA使之不能翻译成蛋白质。siRNA的两条链 中的每一条都可被整合入R I SC复合物。然而，在其5'末端具有较弱的碱基配对的链优 先用于整合。因此，任何siRNA都将导致产生激活的RISC复合物的混合物(其可切割预期 的靶RNA和非靶向的RNA)。在生物学应用中，期望绝大部分，优选所有的激活的RISC复合 物包含与期望的靶互补的siRNA链。本教导提供了不仅可用于减少mRNA被非期望的siRNA 链切割而且还可用于减少内源基...
【技术保护点】
一种化学合成的过客（有义）寡核苷酸，其具有１５至３０个核苷酸的长度并且包含：不依赖于序列的修饰形式（１）、不依赖于序列的修饰形式（２）和不依赖于序列的修饰形式（３）中的一个：（１）５′Ｎ↓［ｐ］－ｍ－ｍ－Ｎ↓［ｘ］－ｍ－ｍ－Ｎ↓［ｑ］－ｎ↓［ｒ］３′，其中ｐ为０或１；ｘ为７、８、９、１０或１１；ｒ为０、１或２；以及ｑ是表示过客链的长度减去（ｐ＋ｘ＋ｒ＋４）的整数；（２）５′Ｎ↓［ｐ］－ｍ－ｍ－Ｎ↓［ｙ］－ｍ－Ｎ↓［ｚ］－ｍ－Ｎ↓［ｑ］－ｎ↓［ｒ］３′，其中ｐ为０或１；ｙ为７、８或９并且ｚ为１；或ｙ为７并且ｚ为２或３；ｒ为０、１或２；以及ｑ是表示过客链的长度减去（ｐ＋ｙ＋ｚ＋...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2007-9-19 60/973,548一种化学合成的过客(有义)寡核苷酸，其具有15至30个核苷酸的长度并且包含不依赖于序列的修饰形式(1)、不依赖于序列的修饰形式(2)和不依赖于序列的修饰形式(3)中的一个(1)5′Np-m-m-Nx-m-m-Nq-nr3′，其中p为0或1；x为7、8、9、10或11；r为0、1或2；以及q是表示过客链的长度减去(p+x+r+4)的整数；(2)5′Np-m-m-Ny-m-Nz-m-Nq-nr3′，其中p为0或1；y为7、8或9并且z为1；或y为7并且z为2或3；r为0、1或2；以及q是表示过客链的长度减去(p+y+z+r+4)的整数；(3)5′m-N1-m-Nx-m-m-Nq-nr3′，其中x为8、9或10；r为0、1或2；以及q为表示过客链的长度减去(x+r+5)的整数；其中，各m独立地是二环核苷酸或三环核苷酸；各n独立地是脱氧核苷酸、修饰的核苷酸或核糖核苷酸；当m是二环核苷酸时，各N独立地是除了二环核苷酸外的核苷酸，和当m是三环核苷酸时，各N独立地是除了三环核苷酸外的核苷酸。2.包含权利要求1的过客(有义)寡核苷酸和引导(反义)寡核苷酸的化学合成的 短干扰RNA，所述引导(反义)寡核苷酸具有15至30个核苷酸，与至少12个核苷酸的过客 (有义)寡核苷酸连续互补的区域；引导链还与靶mRNA的至少一部分具有互补性。3.权利要求2的化学合成的短干扰RNA，其中所述过客(有义)寡核苷酸包含不依赖 于序列的修饰形式(1)，？为0，乂为10且1~为2。4.权利要求2的化学合成的短干扰RNA，其中所述过客(有义)寡核苷酸包含不依赖 于序列的修饰形式(1)，P为0，χ为9或11且r为2。5.权利要求2的化学合成的短干扰RNA，其中所述过客(有义)寡核苷酸包含不依赖 于序列的修饰形式(2)，ρ为0，y为9且r为2。6.权利要求2的化学合成的短干扰RNA，其中至少一个m具有结构(a)、(b)或(c) 其中Rl和R2独立地是O、S、CH2或NR，其中R是氢或C-烷基；R3 是 CH2、CH2-O, CH2-S, CH2-CH2, CH2-CH2-CH2, CH-CH 或 CH2-NR,其中 R 是氢或(^3-烷基；R4和R5独立地是核苷间的连接、末端基团或保护基团； R4和R5中至少一个是核苷间的连接；和 B是核碱基、核碱基衍生物或核碱基类似物。7.权利要求6的化学合成的短干扰RNA，其中所述过客(有义)寡核苷酸包含不依赖 于序列的修饰形式(1)，P为0，χ为10，r为2，并且各m具有结构(a)，其中Rl是0，R2是O 且 R3 是 CH2。8.权利要求6的化学合成的短干扰RNA，其中所述过客(有义)寡核苷酸包含不依赖 于序列的修饰形式(1)，P为l，x为9或10，r为2，并且各m具有结构(a)，其中Rl是0，R2 是0且R3是CH2。9.权利要求6的化学合成的短干扰RNA，其中所述过客(有义)寡核苷酸包含不依赖 于序列的修饰形式(3)，χ为9或10，r为2，并且各m具有结构(a)，其中Rl是0，R2是0且 R3 是 CH2010.权利要求2的化学合成的短干扰RNA，其中所述过客(有义)寡核苷酸和所述引导 (反义)寡核苷酸通过核苷酸环或连接体环共价连接，从而形成短发夹寡核苷酸。11.权利要求2的化学合成的短干扰RNA，其中所述SiRNA的各3'末端独立地具有1 个、2个或3个核苷酸的悬突。12.权利要求2的化学合成的短干扰RNA，其中至少一个核苷间的连接不是磷酸二酯核 苷间连接。13.权利要求2的化学合成的短干扰RNA，其中所述化学合成的短干扰RNA进一步与靶 向细胞的配体结合。14.权利要求2的化学合成的短干扰RNA，其中用磷酸盐/酯、Ch2-烷基、CH2-烷基胺、 CV12-烯基、C1^12-炔基、CV12-环烷基、C1^12-芳烷基、芳基、酰基或甲硅烷基取代基进一步衍 生5'末端。15.包含权利要求2的化学合成的短干扰RNA和生物学上可接受的载体的组合物。16.包含权利要求2的化学合成的短干扰RNA和转染剂的试剂盒。17.使关于通过RNA干扰抑制靶基因表达的脱靶事件减少至最少的方法，该方法包括 将含有靶基因的细胞与足以减少脱靶事件同时保持效力的量的权利要求2的化学合成的 短干扰RNA接触。18.权利要求17的方法，其中所述基因是内源基因。19.权利要求17的方法，其中所述接触是含有所述细胞的细胞培养物或含有所述细胞 的组织与所述化学合成的短干扰RNA的体外接触。20.权利要求17的方法，其中所述接触是含有所述细胞的组织、含有所述细胞的体液 或含有所述细胞的器官与所述化学合成的短干扰RNA的离体接触。21.权利要求17的方法，其中所述接触是含有所述细胞的器官或动物与所述化学合成 的短干扰RNA的体内接触。22.在通过RNA干扰抑制外源提供的靶基因的表达中使由过客链产生的切割减少至最 少的方法，该方法包括将含有所述靶基因的细胞与足以使过客链产生的切割减少至最少 同时保持引导链的效力的量的化学合成的短干扰RNA接触，所述短干扰RNA包含过客(有义)寡核苷酸，其具有15至30个核苷酸的长度，并且包含如下的不依赖于序 列的修饰形式(1)、不依赖于序列的修饰形式(2)和不依赖于序列的修饰形式(3)中的一 个(1)5'Np-m-m-Nx-m-m-Nq-nr3 ‘，其中 ρ 为 O 或 1 ;x 为 7、8、9、10 或 11 ;r 为 O、1 或 2 ； 并且q是表示过客链的长度减去(p+x+r+4)的整数；(2)5‘ Np-m-m-Ny-m-Nz-m-Nq-nr 3'，其中 ρ 为 O 或 l;y 为 7、8 或 9 并且 ζ ...
【专利技术属性】
技术研发人员：N普瑞，I查尔斯，S马格达雷诺，A乌拉索夫，C博内特，
申请(专利权)人：应用生物系统有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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