用于生产重组蛋白质的高细胞密度补料-分批发酵方法技术

本发明专利技术提供生产蛋白质（例如，重组脑膜炎球菌２０８６蛋白质）的方法、以及高密度蛋白质组合物和用于本发明专利技术方法的组合物，所述方法利用补料－分批发酵并在达到阈值参数后连续投入诱导物且任选地连续投入碳源（例如，恒定速度投入）以提高蛋白质产量。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请交叉参考案本申请案主张2006年7月27日申请且名为用于生产重组蛋白质的高细胞密度补料-分批发酵方法(HIGH-CELL DENSITY FED-BATCH FERMENTATION PROCESSFOR PRODUCING RECOMBINANT PROTEIN)的美国临时专利申请案第60/833.479号的优先权，其全部揭示内容均以引用方式并入本文中。
概括来说，本申请案是关于可提高细菌系统中的蛋白质表达的新颖补料-分批发酵方法，以及高密度蛋白质组合物和所述新颖补料-分批发酵方法中所用的组合物。
技术介绍
已利用多种发酵策略来生产供实验室、临床或商业使用的足量蛋白质。利用补料-分批发酵所提供的蛋白质产量比通过简单分批发酵方法所提供的产量高。补料-分批发酵方法在最初分批阶段后进行将一或多种营养物通过补加补充到培养物中的阶段。通常，在分批阶段期间，细胞最初生长到期望浓度。在此阶段，细胞生长旺盛且通常不产生靶蛋白质，除非我们视启动子添加诸如阿拉伯糖、乳糖或异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)等诱导物或启动子有些泄漏。在补料期期间，通常将碳源和其它必需物质以相对浓缩的液体流形式本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生产重组蛋白质的方法，其包含：　培养表达重组蛋白质的重组细菌细胞，此包含向包含所述重组细菌细胞的培养物中连续添加碳源并在所述培养物达到阈值参数后向所述培养物中连续添加诱导物，和自所述培养物中分离所述重组蛋白质。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2006-7-27 60/833,4791、一种生产重组蛋白质的方法，其包含：培养表达重组蛋白质的重组细菌细胞，此包含向包含所述重组细菌细胞的培养物中连续添加碳源并在所述培养物达到阈值参数后向所述培养物中连续添加诱导物，和自所述培养物中分离所述重组蛋白质。2、如权利要求1所述的方法，其中所述阈值参数是光密度(OD)、溶解氧(DO)、培养基中营养物的浓度、添加到培养基中的碳源的总浓度、或其任何组合。3、如权利要求2所述的方法，其中所述阈值参数是所述培养物的光密度(OD)。4、如权利要求3所述的方法，其包含当所述培养物的所述细胞密度达到约70至约110OD600时向所述培养物中连续添加所述诱导物。5、如权利要求4所述的方法，其包含当所述培养物的所述细胞密度达到约70至约105OD600时向所述培养物中连续添加所述诱导物。6、如权利要求5所述的方法，其包含当所述培养物的所述细胞密度达到约75至约85OD600时向所述培养物中连续添加所述诱导物。7、如权利要求6所述的方法，其包含当所述培养物的细胞密度达到约80OD600时向所述培养物中连续添加所述诱导物。8、如权利要求1所述的方法，其包含以恒定速度将所述诱导物添加到所述培养物中、通过DO恒定补料将所述诱导物添加到所述培养物中或通过pH值恒定补料将所述诱导物添加到所述培养物中。9、如权利要求1所述的方法，其包含以约3.35g/L/h至约16g/L/h的恒定速度将所述诱导物添加到所述培养物中、通过DO恒定补料或通过pH值恒定补料将所述诱导物添加到所述培养物中。10、如权利要求1所述的方法，其中添加到所述培养物中的所述诱导物的总量为约4g/L至约40g/L。11、如权利要求10所述的方法，其中在诱导物补料期间添加到所述培养物中的所述诱导物的总量为约5g/L至约20g/L。12、如权利要求11所述的方法，其中在诱导物补料期间添加到所述培养物中的所述诱导物的总量为约7g/L至约15g/L。13、如权利要求12所述的方法，其中在诱导物补料期间添加到所述培养物中的所述诱导物的总量为约10g/L。14、如权利要求1所述的方法，其包含在所述方法开始后将所述诱导物连续添加到所述培养物中达约2至约8小时。15、如权利要求14所述的方法，其包含在开始后将所述诱导物连续添加到所述培养物中达约3至约6小时。16、如权利要求1所述的方法，其包含在开始将所述诱导物添加到所述培养物中之后约2至约8小时分离所述重组蛋白质。17、如权利要求16所述的方法，其包含在开始将所述诱导物添加到所述培养物中之后约3至约6小时分离所述重组蛋白质。18、如权利要求1所述的方法，其中所述诱导物是阿拉伯糖。19、如权利要求1所述的方法，其包含在诱导之前将所述碳源连续添加到所述培养物中。20、如权利要求1所述的方法，其包含在诱导之前和期间将所述碳源连续添加到所述培养物中。21、如权利要求1所述的方法，其包含在将所述诱导物连续添加到所述培养物中的同时将所述碳源连续添加到所述培养物中。22、如权利要求1所述的方法，其包含将所述碳源连续添加到所述培养物中直到所述培养物的所述细胞密度达到约70至约110OD600。23、如权利要求1所述的方法，其中所述碳源是基于糖的碳源。24、如权利要求23所述的方法，其中所述基于糖的碳源是葡萄糖。25、如权利要求24所述的方法，其中所述诱导物是阿拉伯糖。26、如权利要求25所述的方法，其包含在将所述阿拉伯糖连续添加到所述培养基中的同时将所述葡萄糖连续添加到所述培养基中。27、如权利要求25所述的方法，其包含连续添加所述葡萄糖直到所述培养物的所述细胞密度达到约80OD600。28、一种生产重组蛋白质的方法，其包含：a)在诱导型启动子控制下将编码重组蛋白质的表达载体引入到细菌宿主细胞中以形成重组细菌细胞；b)将所述重组细菌细胞引入到培养基中以形成细胞培养物；c)以连续补料形式将碳源添加到所述细胞培养物中；d)监测所述细胞培养物中的细胞生长是否达到阈值光密度(OD600)；e)在达到所述阈值光密度(OD600)后，以连续补料形式将所述诱导型启动子的诱导物添加到所述细胞培养物中；和f)自所述细胞培养物中分离所述重组蛋白质。29、如权利要求28所述的方法，其包含在所述培养物的所述细胞密度达到约70至约110OD600时向所述培养物中连续添加所述诱导物。30、如权利要求29所述的方法，其包含在所述培养物的所述细胞密度达到约70至约105OD600时向所述培养物中连续添加所述诱导物。31、如权利要求30所述的方法，其包含在所述培养物的所述细胞密度达到约75至约85OD600时向所述培养物中连续添加所述诱导物。32、如权利要求31所述的方法，其包含在所述培养物的所述细胞密度达到约80OD600时向所述培养物中连续添加所述诱导物。33、如权利要求28所述的方法，其中所述诱导物是以恒定速度添加到所述培养物中、所述诱导物是通过DO恒定补料添加到所述培养物中或所述诱导物是通过pH值恒定补料添加到所述培养物中。34、如权利要求33所述的方法，其中所述诱导物是以约3.35g/L/h至约16g/L/h的恒定速度添加到所述培养物中、所述诱导物是通过DO恒定补料添加到所述培养物中或所述诱导物是通过pH值恒定补料添加到所述培养物中。35、如权利要求28所述的方法，其中添加到所述培养物中的诱导物总量为约4g/L至约40g/L。36、如权利要求35所述的方法，其中添加到所述培养物中的诱导物总量为约5g/L至约20g/L。37、如权利要求36所述的方法，其中添加到所述培养物中的诱导物总量为约7g/L至约15g/L。38、如权利要求37所述的方法，其中添加到所述培养物中的诱导物总量为约10g/L。39、如权利要求28所述的方法，其包含在开始诱导物补料后约2小时至约8小时自所述培养物中分离所述重组蛋白质。40、如权利要求39所述的方法，其包含在开始诱导物补料后约3小时至约6小时自所述培养物中分离所述重组蛋白质。41、如权利要求28所述的方法，其中在所述碳源和所述诱导物二者的恒定速度补料期间、在所述碳源和所述诱导物二者的DO恒定补料期间或在所述碳源和所述诱导物二者的pH值恒定补料期间将所述碳源添加到所述细胞培养物中。42、如权利要求28所述的方法，其中所述诱导物是阿拉伯...

【专利技术属性】
技术研发人员：卫强威利孙，厄尔珀塞尔，
申请(专利权)人：惠氏公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]