生育控制疫苗制造技术

一种控制生育力的多价疫苗的生产方法．该疫苗具有在哺乳动物繁殖系统中决定簇抗原的多重性，抗原与至少一种载体连接．连接的准确方式可以改变，最好是一种以上载体，从而增强在用单个载体应答微弱的对象中抗体的应答．该新疫苗具有抗繁殖系统的多价能力，特别是有抗多种健康紊乱的免疫防护能力．（*该技术在2006年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
此项专利技术与控制生育的疫苗有关，特别是与生育系统中具有多个决定性抗原的多价疫苗有关，这些抗原与至少一个或多个载体相连。本专利技术通过抗体阻断一种或多种促性腺激素这种主动免疫机制来达到控制生育的目的。垂体促黄体生成激素(LH)和绒毛膜促性腺激素(CG)在灵长目动物的生育调节中起重要的作用。前者对排卵、和甾类物质形成、后者对黄体激素的释放和甾类物质水平的维持直至转移到胎盘十分重要。人类的绒毛膜促性腺激素(hc G)是滋养细胞的一种早期产物，据认为它对妊娠发生和维持十分重要。已证实无论主动和被动免疫法在控制灵长目繁殖生育上均为有效。弗氏佐剂(C.F.A)在免疫工作中已被使用，但在人身上使用尚难以接受。此项专利技术是一种活性多价疫苗，它在不使用C.F.A的情况下可诱发灵长目动物两种促性腺激素抗体的形成。本专利技术的疫苗可导致形成能与完整的hcG分子-它由α和β两个亚单位组成一发生反应的抗体，以中和其生物活性并在一定程度上减低LH的生物活性。此疫苗产生的抗体与机体组织无交叉反应，其抗体反应是可控的并具有合理的长期性，产生的免疫是可逆的，对人体功能无毒，无禁忌症而且不会引起其它的过敏问题。此项专利技术所用的抗hcG免疫性，在专利技术者以前已为人所知，特别是专利技术者较早的加拿大1054937号专利(发表于1979.5.22)及1.057.742号专利(Stevens，发表于1979.7.3)。但是这两位抗hcG疫苗的研究者使用了基本不同的方法。本专利技术使用了hcG的β亚单位，而Stevens用的是同一亚单位的37氨基酸的羧端多肽(cTP)。这种“自身”蛋白产生免疫的方式也是不同的。本专利技术者使用了一种载体，例如破伤风类毒素，而Stevens及其同事最初提倡使用蛋白质的半抗原改良法，后来它们还是选择了载体的方法。hcG是一种由α和β两种亚单位构成的糖蛋白激素。对脑垂体的其它三种激素TSH.LH和FSH来说α亚单位是共同的，而β亚单位提供了这些激素各自的特性。因此仅仅使用hcG的β亚单位作为抗原可减少一些抗体与其它糖蛋白激素发生交叉反应的机会，特别是与TSH和FSH反应的机会。由于雌性免疫系统在正常情况下对hcG是有耐受性的，注射激素将不会产生抗体。免疫将通过改良分子结构产生，这有两个方法或在分子上附加半抗原成份，或将分子与一个产生免疫的载体蛋白相连接，因而，前述加拿大第1054937号专利中，使用了βhcG与破伤风类毒素形成化学性连接的疫苗，其免疫作用是有效的。这种疫苗产生的抗体对妊娠激素hcG及破伤风类毒素均有拮抗作用，但对一些其抗体反应太低，以至不能予防受孕发生的“低应答者”对象的有效性则不能肯定。对象中反应的明显不同(构成不同)表明需要改进疫苗以使其既使不是全部也是大部分对象能产生适当的抗体反应。本专利技术试图提供一种与βhcG-TT疫苗比较，改良的免疫抗原以在哺乳动物中产生较高的hcG抗体，建议使用一种以上的载体，以在对一种既定载体低反应对象中产生良好的抗体反应。本专利技术提供了一种制备多价疫苗的方法，该方法有以下几个步骤(a)提取生殖系统至少两种分离抗原，第一种是hcGβ亚单位制剂，第二种是一种精子抗原或一种LH的异种α或β亚单位的制剂，(b)得到至少一种适合对象的载体，(c)上述(a)步骤的至少两种抗原与(b)步骤至少一种载体，通过下述一组的至少一个步骤而结合(Ⅰ)上述至少两种分离抗原与同一载体连接形成一个合成结合物，(Ⅱ)上述至少两个分离抗原分别与上述一个载体连接，形成的结合物再行物理性混合(Ⅲ)上述两个分离抗原即hcGβ亚单位和上述之异种α亚单位相结合，形成一个退火的合成物，然后再与上述一个载体结合，如果出现多个载体，则(Ⅳ)形成一个至少有一个抗原的多价结合物，这个抗原与至少一个精子抗原和至少一个载体同时连接，(Ⅴ)形成上述抗原与一个上述载体连接的结合物，如果需要，(d)将两个或多个自(Ⅰ)到(Ⅴ)的结合产物相连接。另一方面，本专利技术也提供了一种多价疫苗制备的方法，即对单一载体结合疫苗有低的抗体反应的哺乳动物使用多个载体，这个过程包括以下步骤(a)提取生殖系统至少两个分离抗原，第一个是制备的hcGβ亚单位，第二个是制备的一个精子抗原或LH的异种α或β亚单位(b)得到至少两个与对象适合的纯的载体，(c)上述(a)步骤中至少两种抗原与上述(b)步骤中至少两个载体，通过下述一组中至少一个步骤而结合。(Ⅰ)上述至少两种分离抗原与同一载体相连接，形成一种合成结合物，(Ⅱ)上述至少两个分离抗原分别与至少一个上述载体相连接，形成的结合物再行物理性混合，(Ⅲ)上述至少两个分离抗原即hcGβ亚单位和上述一种LH异种α亚单位相结合，形成一个退火的合成物，然后再与上述一个载体结合，(Ⅳ)形成至少一个同时与至少一个精子抗原和至少一个载体相连接的抗原的多价结合物，(Ⅴ)形成一个与上述一个载体相连的抗原的结合物，如果需要，(d)将两个或更多的自(Ⅰ)到(Ⅴ)的结合物相联接。再一方面，本专利技术还提供了一种多效价疫苗，它由生殖系统的至少两种抗原构成，但有下列条件即在同种抗原情况下，该抗原对生殖系统是特异的，至少一个适合对象的载体，上述多价疫苗是选自下列一组的(Ⅰ)至少两个分离抗原与同一载体的一部分相连接 的一种合成结合物(Ⅱ)至少两个分离抗原，每个分别与至少一个载体相连 的结合物的混合物(Ⅲ)至少两个分离抗原即hcGβ亚单位和异种α亚单位的退火合成物，再结合到一个载体上，(Ⅳ)与至少一种精子抗原和至少一个载体抗原连接的多价结合物，(Ⅴ)(Ⅰ)至(Ⅳ)中至少两种产物的混合物。另外，本专利技术还提供了一个应用价疫苗控制生育的方法，即给予雌性哺乳动物足够予防受孕的剂量和频率的上述疫苗。因而，本专利技术增加了免疫发生能力。通过由生殖系统的与多个载体相连接的多个抗原组成的多价疫苗的制备，解决了结构变化或“低应答”问题。在生殖系统中，人们寻找以多种方式解决阻断或中和问题。这个新的结合物由至少两个与一个以上载体相连接的抗原构成，其中一个抗原即βhcG。由这些新的结合物形成的新的疫苗被认为具有抗生殖系统的多种效能和具有针对不同的个体遗传特性产生良好的抗体反应的能力。在一个优选的实施方案中，βhcG亚单位与一个异种α亚单位，例如αOLH一起退火，有助于取得决定激素活性的最佳构象，因而可提供产生抗体的可能性。这种抗体可识别这种构象并防止组织受体与激素的互相作用。应用异种α亚单位是十分重要的，因为hcG的α亚单位对其它三种激素h T SH、h F SH和h LH也是共同的。与h T SH和h F SH发生交叉反应是禁忌，因此不能为了形成hcG有生物活性的最佳构象而用同源α亚单位(人的)。例如，羊的LHα亚单位可与βhcG退火以产生(a)最佳构型(b)增加免疫原(c)有利于进一步防止与h T SH和h F SH发生交叉反应。本专利技术的多价疫苗包括与一种精子抗原和/或一种LH异种β亚单位在一起的hcGβ亚单位，以提供多种抗原决定簇。这样即可生成不同的抗体，在不同的点上阻断繁殖。这些决定簇可以混合结合物的形式出现在新的多价疫苗中，它们或是附着于同一载体(即形成混合结合物)或附着于同一载体的不同分子上或事实上本文档来自技高网...

【技术保护点】
制备多价疫苗的方法，包括下列步骤：（１）提取繁殖系统至少两种的分离抗原，头一个是ｈｃＧ的β亚单位制剂，第二是一个精子抗原或一个ＬＨ的异种α或β亚单位的制剂。（２）得到含至少一种适合对象的载体的免疫纯制剂。（３）采用下面一组中选出 的至少一种步骤将步（１）中的至少两种抗原与步（２）中至少一种载体结合。（Ⅰ）将至少两种分离的抗原与同一个载体连接形成合成结合物。（Ⅱ）将至少两种分离的抗原分别连接到至少一种载体上，形成结合物的物理混合物，（Ⅲ）将至少两种分离抗原 ｈｃＧ的β亚单位和异种ｘ亚单位结合形成一个退火组合物，然后再与载体结合，和（Ⅳ）将至少一种抗原既与至少一种精子抗原结合，又和至少一种载体结合，形成多价结合物，和（Ⅴ）用一种以上载体，形成一种所述抗原与一种所述载体连接的结合物，和 如果需要，（４）将两种或多种上面步骤（Ⅰ）到（Ⅴ）所得结合产物再结合到一起。

【技术特征摘要】
1.制备多价疫苗的方法，包括下列步骤(1)提取繁殖系统至少两种的分离抗原，头一个是hcG的β亚单位制剂，第二是一个精子抗原或一个LH的异种α或β亚单位的制剂。(2)得到含至少一种适合对象的载体的免疫纯制剂。(3)采用下面一组中选出的至少一种步骤将步(1)中的至少两种抗原与步(2)中至少一种载体结合。(Ⅰ)将至少两种分离的抗原与同一个载体连接形成合成结合物。(Ⅱ)将至少两种分离的抗原分别连接到至少一种载体上，形成结合物的物理混合物，(Ⅲ)将至少两种分离抗原hcG的β亚单位和异种α亚单位结合形成一个退火组合物，然后再与载体结合，和(Ⅳ)将至少一种抗原既与至少一种精子抗原结合，又和至少一种载体结合，形成多价结合物，和(Ⅴ)用一种以上载体，形成一种所述抗原与一种所述载体连接的结合物，和如果需要，(4)将两种或多种上面步骤(Ⅰ)到(Ⅴ)所得结合产物再结合到一起。2.根据权利要求1所述方法，其中步骤(Ⅰ)、(Ⅱ)和(Ⅴ)中所述βhcG与异种α亚单位退火形成组合物。3.根据权利要求1或2所述方法，其中所述的一种抗原是精子抗原。4.根据权利要求1，2或3所述方法，其中用一种以上的载体。5.根据权利要求1，2或3所述方法，其中所说的至少两种分离的抗原是激素亚单位或它们的片段。6.根据权利要求1，2或3所述方法，其中所述的至少两种分离的抗原为βolH和βhcG。7.根据权利要求1，2或3所述方法，其中存在两种适合对象的载体。8.根据权利要求1，2或3所...

【专利技术属性】
技术研发人员：古萨伦P塔尔沃，
申请(专利权)人：国家免疫学研究所，
类型：发明
国别省市：IN[印度]