用于诊断与治疗目的的微小RNA(MIRNA)和下游靶标制造技术

本发明专利技术涉及微小RNA的启动子区、微小RNA、特别是miR‑21的用途、以及用于诊断的相关成分和用于制备治疗和/或预防纤维变性和/或纤维变性相关疾病的药物的相关成分。另外，本发明专利技术涉及针对miR‑21的靶标的反义寡核苷酸。还包括miR‑21缺陷型细胞、启动子区和miR‑21的靶标及其敲除生物。最后，本发明专利技术涉及用于诊断纤维变性和/或纤维变性相关疾病的方法以及用于筛选用于治疗纤维变性和/或纤维变性相关疾病的有药物活性的化合物的方法。本发明专利技术还涉及用于治疗、改善和/或预防纤维变性的组合物。在某些实施方案中，所述组合物调节用于治疗、改善和/或预防纤维变性的miRNA的活性。在某些实施方案中，组合物抑制用于治疗、改善和/或预防纤维变性的miR‑21的活性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于诊断、预防和/或治疗纤维变性和其它疾病的微小 RNA(miRNA)、特别是miR_21及其下游靶标的领域。本专利技术还涉及用于治疗纤维变性 的组合物、方法和用途。这类方法包括调节和抑制患有纤维变性的受治疗者的miRNA活 性。专利技术背景微小RNA是一大类小的非编码RNA，它控制多种生物过程，包括由调节互补的 靶mRNA的表达而导致主要的信号转导途径(Ambros，2004)。在各种疾病实体中微小 RNA的失调是由基因组改变(Mi等，2007)、差异性表达或者在某些情况下将微小RNA 功能改变成为肿瘤抑制物或癌基因的病毒感染所引起的。最近在一系列精细的遗传学研 究中，微小RNA涉及不同心脏功能的调节(Care等，2007; Yang等，2007)。虽然这些 研究有助于勾画出微小RNA在心脏生理学、生长和形态发生中的作用，但是对微小RNA 在体内疾病途径中的详尽分子机制的了解不多。研究表明，单链寡核苷酸微小RNA拮 抗剂在体外和体内使内源微小RNA沉默，因而对靶mRNA和蛋白质水平及代谢产生作用 (Kruetzfeldt等，2005 ； :Esau等，2006)。这些研究结果表明微小RNA拮抗剂的应用在体 内证实了微小RNA的功能，或许更重要的是成为新的治疗方式。专利技术_既述本专利技术涉及微小RNA的启动子区(promoter region)、微小RNA、特别是miR-21的用途、以及用于诊断及用于制备治疗和/或预防纤维变性和/或纤维变性相关疾病的 药物的相关成分。另外，本专利技术涉及针对miR-21的靶标的各种反义寡核苷酸。还包括 miR-21、启动子区和miR-21的靶标缺陷型细胞及其敲除生物。最后，本专利技术涉及用于 诊断纤维变性和/或纤维变性相关疾病的方法以及筛选用于治疗纤维变性和/或纤维变性 相关疾病的有药物活性的化合物的方法。本文提供用于治疗纤维变性的方法，所述方法包括给予患有或疑似患有纤维变 性的受治疗者包含修饰寡核苷酸的化合物，所述修饰寡核苷酸由12-30个连接核苷组成 并且具有与miRNA互补的核苷碱基(nucleobase)序列。本文提供的方法包括鉴定患有或疑似患有纤维变性的受治疗者；给予受治疗者 包含修饰寡核苷酸的化合物，所述修饰寡核苷酸由12-30个连接核苷组成，其中修饰寡 核苷酸的核苷碱基序列与miRNA或其前体互补。本文提供的方法包括给予有发生纤维变性风险的受治疗者包含修饰寡核苷酸的 化合物，所述修饰寡核苷酸由12-30个连接核苷组成并且具有与miRNA或其前体互补的 核苷碱基序列，从而预防纤维变性。在某些实施方案中，纤维变性是肝纤维变性。在 某些实施方案中，纤维变性是肺纤维变性。在某些实施方案中，纤维变性是皮肤纤维变 性。在某些实施方案中，纤维变性是年龄相关性纤维变性。在某些实施方案中，纤维变 性是心脏纤维变性。在某些实施方案中，纤维变性是肾纤维变性。在某些实施方案中， 纤维变性是脾纤维变性。11本文提供的方法包括给予患有或疑似患有纤维变性的受治疗者包含修饰寡核苷 酸的化合物，所述修饰寡核苷酸由12-30个连接核苷组成并且具有与miRNA或其前体互 补的核苷碱基序列，其中受治疗者患有至少一种心脏疾病或病症。本专利技术提供的方法包括鉴定患有或疑似患有纤维变性的受治疗者，其中受治疗 者患有至少一种心脏疾病或病症；并且给予受治疗者包含修饰寡核苷酸的化合物，所述 修饰寡核苷酸由12-30个连接核苷组成，其中修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miRNA或 其前体互补。在某些实施方案中，心脏疾病或病症选自心脏肥大、高血压性心力衰竭、舒张 性心力衰竭、收缩性心力衰竭、心脏相关性贮积病、心肌病、缩窄性心包炎、冠状动脉 疾病、急性心肌梗死、慢性心肌梗死、右心衰竭、心律失常、心肌炎相关性纤维变性和 心脏瓣膜疾病。在某些实施方案中，心肌病选自扩张型心肌病、梗阻性肥厚型心肌病、无梗阻 肥厚型心肌病、限制性心肌病、致心律失常性右室心肌病和糖尿病性心肌病。在某些实施方案中，心脏瓣膜疾病选自二尖瓣狭窄、主动脉瓣狭窄、三尖瓣狭 窄和肺动脉瓣狭窄。在某些实施方案中，心脏瓣膜疾病选自二尖瓣闭锁不全、主动脉瓣闭锁不全、 三尖瓣闭锁不全和肺动脉瓣闭锁不全。在某些实施方案中，本文提供的方法还包括给予一种或多种另外的药物。在某些实施方案中，给药改善心脏重量增加、左心室扩张或缩短分数的减低 (impairment of fractional shortening) ο在某些实施方案中，给药防止心脏重量增加、左心室扩张或缩短分数的减低。在某些实施方案中，给药改善心脏功能。在某些实施方案中，给药包括静脉内给药、皮下给药、动脉内给药或心脏内给 药。本文提供用于治疗纤维变性的方法，所述方法包括给予患有或疑似患有纤维变 性的受治疗者包含修饰寡核苷酸的化合物，所述修饰寡核苷酸由12-30个连接核苷组成 并且具有与miRNA或其前体互补的核苷碱基序列，其中受治疗者患有至少一种肝脏疾病 或病症。本文提供的方法包括鉴定患有或疑似患有纤维变性的受治疗者，其中受治疗者 患有至少一种肝脏疾病或病症；并且给予受治疗者包含修饰寡核苷酸的化合物，所述修 饰寡核苷酸由12-30个连接核苷组成，其中修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miRNA或其 前体互补。在某些实施方案中，至少一种肝脏疾病或病症是慢性肝损伤。在某些实施方 案中，至少一种肝脏疾病或病症是肝炎病毒感染。在某些实施方案中，肝炎感染是丙型 肝炎感染。在某些实施方案中，至少一种肝脏疾病或病症是非酒精性脂肪性肝炎。在某 些实施方案中，给药包括静脉内给药或皮下给药。在某些实施方案中，至少一种肝脏疾 病或病症是肝硬化。在某些实施方案中，给药改善肝功能。本文提供用于治疗纤维变性的方法，所述方法包括给予患有或疑似患有纤维变 性的受治疗者包含修饰寡核苷酸的化合物，所述修饰寡核苷酸由12-30个连接核苷组成 并且具有与miRNA或其前体互补的核苷碱基序列，其中受治疗者患有至少一种肺部疾病或病症。本文提供的方法包括鉴定患有或疑似患有纤维变性的受治疗者，其中受治疗者 患有至少一种肺部疾病或病症；并且给予受治疗者包含修饰寡核苷酸的化合物，所述修 饰寡核苷酸由12-30个连接核苷组成，其中修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miRNA或其 前体互补。在某些实施方案中，至少另一种肺部疾病或病症是慢性阻塞性肺部疾病。在 某些实施方案中，给药包括经肺给药。本文提供用于治疗纤维变性的方法，所述方法包括给予患有或疑似患有纤维变 性的受治疗者包含修饰寡核苷酸的化合物，所述修饰寡核苷酸由12-30个连接核苷组成 并且具有与miRNA或其前体互补的核苷碱基序列，其中受治疗者患有至少另一种疾病或 病症。本专利技术提供的方法包括鉴定患有或疑似患有纤维变性的受治疗者，其中受治疗 者患有至少另一种疾病或病症；并且给予受治疗者包含修饰寡核苷酸的化合物，所述修 饰寡核苷酸由12-30个连接核苷组成，其中修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miRNA或其 前体互补。在某些实施方案中，至少另一种疾病或病症是肺动脉高压。在某些实施方 案中，至少另一种疾病或病症是血管相关性疾病。在某些实施方案中，血管相关性疾病 选自动脉僵硬(arterial stiffoess)、me本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于治疗纤维变性的方法，所述方法包括给予患有或疑似患有纤维变性的受治疗者包含修饰寡核苷酸的化合物，所述修饰寡核苷酸由１２－３０个连接核苷组成并且具有与ｍｉＲ－２１或其前体互补的核苷碱基序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】EP 2008-2-27 08003570.2;EP 2009-2-19 PCT/EP2009/051.一种用于治疗纤维变性的方法，所述方法包括给予患有或疑似患有纤维变性的受 治疗者包含修饰寡核苷酸的化合物，所述修饰寡核苷酸由12-30个连接核苷组成并且具 有与miR-21或其前体互补的核苷碱基序列。2.—种方法，所述方法包括鉴定患有或疑似患有纤维变性的受治疗者；和给予所述受治疗者包含修饰寡核苷酸的化合物，所述修饰寡核苷酸由12-30个连接 核苷组成，其中修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21或其前体互补。3.一种预防纤维变性的方法，所述方法包括给予有发生纤维变性风险的受治疗者 包含修饰寡核苷酸的化合物，所述修饰寡核苷酸由12-30个连接核苷组成并且具有与 miR-21或其前体互补的核苷碱基序列。4.权利要求1、2或3的方法，其中所述纤维变性是肝纤维变性、心脏纤维变性、肾 纤维变性、肺纤维变性、皮肤纤维变性、年龄相关性纤维变性或脾纤维变性。5.一种方法，所述方法包括给予患有或疑似患有纤维变性的受治疗者包含修饰寡核 苷酸的化合物，所述修饰寡核苷酸由12-30个连接核苷组成并且具有与miR-21或其前体 互补的核苷碱基序列，其中所述受治疗者患有至少一种心脏疾病或病症。6.—种方法，所述方法包括鉴定患有或疑似患有纤维变性的受治疗者，其中所述受治疗者患有至少一种心脏疾 病或病症；和给予所述受治疗者包含修饰寡核苷酸的化合物，所述修饰寡核苷酸由12-30个连接 核苷组成，其中所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21或其前体互补。7.权利要求5或6的方法，其中所述心脏疾病或病症选自心脏肥大、高血压性心力衰 竭、舒张性心力衰竭、收缩性心力衰竭、心脏相关性贮积病、心肌病、缩窄性心包炎、 冠状动脉疾病、急性心肌梗死、慢性心肌梗死、右心衰竭、心律失常、心肌炎相关性纤 维变性和心脏瓣膜疾病。8.权利要求7的方法，其中所述心肌病选自扩张型心肌病、梗阻性肥厚型心肌病、无 梗阻肥厚型心肌病、限制性心肌病、致心律失常性右室心肌病和糖尿病性心肌病。9.权利要求7的方法，其中所述心脏瓣膜疾病选自二尖瓣狭窄、主动脉瓣狭窄、三尖 瓣狭窄和肺动脉瓣狭窄。10.权利要求7的方法，其中所述心脏瓣膜疾病选自二尖瓣闭锁不全、主动脉瓣闭锁 不全、三尖瓣闭锁不全和肺动脉瓣闭锁不全。11.权利要求5-10中任一项的方法，所述方法包括给予一种或多种另外的药物。12.权利要求11的方法，其中一种或多种另外的药物选自利尿药、inotropes、地 高辛、血管扩张药、血管紧张素II转化酶(ACE)抑制剂、血管紧张素II受体阻滞药 (ARB)、钙通道阻滞药、硝酸异山梨酯、胼屈嗪、硝酸盐、胼屈嗪、β-阻滞药和利尿纳 肽。13.权利要求5-11中任一项的方法，其中所述给药包括静脉内给药、皮下给药、动脉 内给药或心脏内给药。14.权利要求5-13中任一项的方法，其中所述给药改善心脏重量增加、左心室扩张或 缩短分数的减低。15.权利要求5-14中任一项的方法，其中所述给药防止心脏重量增加、左心室扩张或 缩短分数的减低。16.权利要求5-15中任一项的方法，其中所述给药改善心脏功能。17.一种用于治疗纤维变性的方法，所述方法包括给予患有或疑似患有纤维变性的受 治疗者包含修饰寡核苷酸的化合物，所述修饰寡核苷酸由12-30个连接核苷组成并且具 有与miR-21或其前体互补的核苷碱基序列，其中所述受治疗者患有至少一种肝脏疾病或 病症。18.—种方法，所述方法包括鉴定患有或疑似患有纤维变性的受治疗者，其中所述受治疗者患有至少一种肝脏疾 病或病症；和给予所述受治疗者包含修饰寡核苷酸的化合物，所述修饰寡核苷酸由12-30个连接 核苷组成，其中所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21或其前体互补。19.权利要求17或18的方法，其中至少一种肝脏疾病或病症是慢性肝损伤。20.权利要求17或18的方法，其中至少一种肝脏疾病或病症是肝炎病毒感染。21.权利要求20的方法，其中所述肝炎感染是丙型肝炎感染。22.权利要求17或18的方法，其中至少一种肝脏疾病或病症是非酒精性脂肪性肝炎。23.权利要求17或18的方法，其中至少一种肝脏疾病或病症是肝硬化。24.权利要求17-23中任一项的方法，其中所述给药包括静脉内给药或皮下给药。25.权利要求17-24中任一项的方法，其中所述给药改善肝功能。26.一种用于治疗纤维变性的方法，所述方法包括给予患有或疑似患有纤维变性的受 治疗者包含修饰寡核苷酸的化合物，所述修饰寡核苷酸由12-30个连接核苷组成并且具 有与miR-21或其前体互补的核苷碱基序列，其中所述受治疗者患有至少一种肺部疾病或 病症。27.—种方法，所述方法包括鉴定患有或疑似患有纤维变性的受治疗者，其中所述受治疗者患有至少一种肺部疾 病或病症；和给予所述受治疗者包含修饰寡核苷酸的化合物，所述修饰寡核苷酸由12-30个连接 核苷组成，其中所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21或其前体互补。28.权利要求26或27的方法，其中至少另一种肺部疾病或病症是慢性阻塞性肺部疾病。29.权利要求26-28中任一项的方法，其中所述给药包括经肺给药。30.一种用于治疗纤维变性的方法，所述方法包括给予患有或疑似患有纤维变性的受 治疗者包含修饰寡核苷酸的化合物，所述修饰寡核苷酸由12-30个连接核苷组成并且具 有与miR-21或其前体互补的核苷碱基序列，其中所述受治疗者患有至少另一种疾病或病症。31.—种方法，所述方法包括鉴定患有或疑似患有纤维变性的受治疗者，其中所述受治疗者患有至少其它的疾病 或病症；和给予所述受治疗者包含修饰寡核苷酸的化合物，所述修饰寡核苷酸由12-30个连接 核苷组成，其中所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21或其前体互补。32.权利要求30或31的方法，其中至少另一种疾病或病症是肺动脉高压。33.权利要求30或31的方法，其中至少另一种疾病或病症是血管相关性疾病。34.权利要求33的方法，其中所述血管相关性疾病选自动脉僵硬、mediasclerosis和动 脉硬化。35.权利要求30或31的方法，其中至少另一种疾病或病症是肠硬化。36.权利要求30或31的方法，其中至少另一种疾病或病症是全身性硬皮病。37.权利要求30或31的方法，其中至少另一种疾病或病症选自腹膜后纤维变性、增 生性纤维变性、增殖性纤维变性、肾源性系统性纤维变性、充血性纤维变性、纵隔纤维 变性、骨髓纤维变性、输精管切除术后疼痛综合征、类风湿性关节炎。38.权利要求33-37中任一项的方法，其中所述给药包括静脉内给药、皮下给药、动 脉内给药、心脏内给药或经肺给药。39.权利要求1-38中任一项的方法，其中所述给药改善纤维变性。40.权利要求1-38中任一项的方法，其中所述给药减缓纤维变性进一步发展。41.权利要求1-38中任一项的方法，其中所述给药终止纤维变性进一步发展。42.权利要求1-38中任一项的方法，其中所述给药减轻纤维变性。43.一种用于治疗纤维增生性疾病的方法，所述方法包括给予患有或疑似患有纤维增 生性疾病的受治疗者包含修饰寡核苷酸的化合物，所述修饰寡核苷酸由12-30个连接核 苷组成，其中所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21或其前体互补，从而治疗纤维 增生性疾病。44.一种用于抑制成纤维细胞增殖的方法，所述方法包括使成纤维细胞与包含由 12-30个连接核苷组成的修饰寡核苷酸的化合物接触，其中所述修饰寡核苷酸的核苷碱基 序列与miR-21或其前体互补，从而抑制成纤维细胞增殖。45.—种用于刺激成纤维细胞凋亡的方法，所述方法包括使成纤维细胞与包含由 12-30个连接核苷组成的修饰寡核苷酸的化合物接触，其中所述修饰寡核苷酸的核苷碱基 序列与miR-21或其前体互补，从而刺激成纤维细胞凋亡。46.一种用于在成纤维细胞中增加Spmutyl蛋白的方法，所述方法包括使成纤维细胞 与包含由12-30个连接核苷组成的修饰寡核苷酸的化合物接触，其中所述修饰寡核苷酸 的核苷碱基序列与miR-21或其前体互补，从而刺激Spmutyl蛋白表达。47.上述权利要求中任一项的方法，其中所述修饰寡核苷酸由12-30个连接核苷组成。48.上述权利要求中任一项的方法，其中所述修饰寡核苷酸由12、13或14个连接核 苷组成。49.上述权利要求中任一项的方法，其中所述修饰寡核苷酸由15-24个连接核苷组成。50.上述权利要求中任一项的方法，其中所述修饰寡核苷酸由15、16、17、18、19、 20、21、22、23或24个连接核苷组成。51.上述权利要求中任一项的方法，其中所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21或其前体的核苷碱基序列的错配不多于2个。52.上述权利要求中任一项的方法，其中所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21 或其前体的核苷碱基序列的错配不多于1个。53.上述权利要求中任一项的方法，其中所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21 或其前体的核苷碱基序列无错配。54.上述权利要求中任一项的方法，其中所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列包含SEQ ID NO 12的核苷碱基序列的至少15个、至少16个、至...

【专利技术属性】
技术研发人员：T图姆，J鲍尔萨赫斯，S恩格尔哈德特，C格罗斯，
申请(专利权)人：朱利叶斯马克西米利安维尔茨堡大学，
类型：发明
国别省市：DE[德国]