一种单侧输尿管结扎再通动物模型及其建立方法技术

本发明专利技术公开了一种单侧输尿管结扎再通动物模型的建立方法，包括如下步骤：１）制备弹性塑胶管；２）ＳＤ雄性大鼠接受左输尿管植入弹性塑胶脂肪垫加压结扎梗阻后，分别于第７日后接受第二次手术，在第二次手术中，取出植入弹性塑胶管，疏通左侧输尿管，从而解除左肾梗阻，同时将右肾包膜分离，４号线结扎右侧输尿管。此外，本发明专利技术还公开了采用上述方法构建的动物模型。本发明专利技术的动物模型能引起肾功能下降，肾小管间质有纤维化的改变。本发明专利技术的造模周期短、见效快、成本低、使用方便，模型性能稳定、重复性好，既能观察梗阻后肾脏病理形态学变化又能研究其功能水平并能体现这二者之间的联系，为临床研发预防和治疗肾纤维化药物提供新的研究对象。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属动物模型领域，尤其涉及一种以大鼠单侧输尿管弹性塑胶结扎梗阻以及 再通致肾小管间质纤维化的新型动物模型，此外，本专利技术还涉及该动物模型的建立方法。
技术介绍
肾纤维化是各种原因的肾脏疾病发展至终末期肾衰竭(end-stage renal disease,ESRD)的共同途径和主要的病理基础。这是一种危害人民健康的严重疾病。尽管 我国ESRD患病率(300/百万人)低于日本(1642/百万人)、台湾(1423/百万人)和美国 (1403/百万人)，但是我国慢性肾脏病的发病率相当高，终末期肾病的潜在威胁很大，专家 预计ESRD患病率将以每年10%左右的速度增长。透析是终末期肾病的主要治疗方法，每 年数百亿的高额诊疗费用为国家、企业及患者本人带来了沉重的经济负担。但在我国ESRD 的治疗率和可及性与发达国家还存在着较大差距。据肾脏病透析登记资料显示，仅有不到 10%的患者在接受透析治疗(约4万人)，且多集中在大中城市，说明不少患者由于经济 等原因得不到及时的透析治疗。即使在享受基本医疗保险的人群中，也有些患者由于经济 等各种原因得不到有效的治疗。一个透析病人的年治疗费用高达8-10万元。尽管基本医 疗保险统筹基金支付了 70-90%的治疗费用，剩余的上万元的透析费用对患者本人来说仍 然是很大的压力。过重的经济负担迫使许多患者减少透析次数，这不仅严重地影响了他们 的生活质量和生存率，还阻碍了他们回归社会、重新工作的进程，造成社会生产力的极大浪 费。因此，一方面不仅要在社会保障上增加投入，另一方面更需要我们通过寻求经济、简单、 安全、高效的抗肾纤维化药物来减少疾病的发生发展，从而研发预防和治疗肾纤维化的药 物在当前显得尤为必要，因此研制导致肾纤维化的符合临床慢性肾衰发展机理的动物模型 就显得尤为重要，单侧输尿管节扎(UUO)模型作为经典的肾小管间质纤维化动物模型为学 术界所公认。但是传统单侧输尿管节扎(UUO)模型只能观察梗阻后肾组织的组织形态学变 化，对于受损肾脏的功能难以评价，所以在研发预防和治疗肾纤维化药物的动物模型方面 受到极大的局限性。有鉴于此，建立一种既能观察梗阻后肾脏病理形态学变化又能研究其 功能水平以及体现这二者之间的联系的新模型，为临床研发预防和治疗肾纤维化药物提供 新的研究对象显的尤为必要。与传统的UUO模型相比而言，输尿管弹性塑胶加压结扎以及 再通模型更具有观察中药抗纤维化作用的灵敏度和时效性。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服了传统UUO模型的缺点，提供一种单侧输尿管结 扎再通动物模型及其建立方法，本专利技术的造模周期短、见效快、成本低、使用方便，模型性能 稳定、重复性好，既能观察梗阻后肾脏病理形态学变化又能研究其功能水平并能体现这二 者之间的联系。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是一种单侧输尿管结扎再通动物模型的建立方法，包括如下步骤1)制备弹性塑胶管，可采用PVC塑胶管微火加热拉升制备直径大小为输尿管粗细 的弹性塑胶管。2)模型制备SD雄性大鼠接受左输尿管植入弹性塑胶脂肪垫加压结扎梗阻后，于 第7日后接受第二次手术，在第二次手术中，取出植入弹性塑胶管，疏通左侧输尿管，从而 解除左肾梗阻，同时将右肾包膜分离，4号线结扎右侧输尿管，术后记录大鼠的生存状况、尿量。该方法还包括步骤3)组织学检查分别于再通术后第7和14日、21日处死大鼠， 通过腹主动脉取血，监测肾功能水平，肾小管功能尿β 2微球蛋白，尿NAG，从而了解左肾 功能，动态观察肾组织形态的改变。该方法还包括步骤4)病理评价所有大鼠处死后取出左肾，去除包膜后纵行切开 肾脏，进行肾脏大小、肾实质厚度测量，一部分肾组织固定后进行病理检查、免疫组化染色。此外，本专利技术还提供一种采用上述方法构建的单侧输尿管结扎再通动物模型。与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于实验结果显示本专利技术的动物模型能引 起肾功能下降，肾小管间质有纤维化的改变。本专利技术的造模周期短、见效快、成本低、使用方 便，模型性能稳定、重复性好，既能观察梗阻后肾脏病理形态学变化又能研究其功能水平并 能体现这二者之间的联系，为临床研发预防和治疗肾纤维化药物提供新的研究对象。与传 统的UUO模型相比而言，本专利技术输尿管弹性塑胶加压结扎以及再通动物模型更符合临床慢 性肾功能衰竭的进展过程，为临床提供中药改善肾功能、逆转肾纤维化最佳时间窗口，因此 具有更好的抗肾小管间质纤维化作用的灵敏度和时效性。附图说明图1是本专利技术实施例1中肾脏组织病理肾组织Masson特染(假手术组)的光镜 观察示意图；图2是本专利技术实施例1中肾脏组织病理肾组织Masson特染(再通模型组7天) 的光镜观察示意图；图3是本专利技术实施例1中肾脏组织病理肾组织Masson特染(再通模型组14天) 的光镜观察示意图；图4是本专利技术实施例1中肾脏组织病理肾组织Masson特染(再通模型组21天) 的光镜观察示意图；图5是本专利技术实施例中免疫组化染色α -SMA (阴性对照)的示意图；图6是本专利技术实施例中免疫组化染色α _SMA(再通假手术组)的示意图；图7是本专利技术实施例中免疫组化染色α -SMA (再通模型7天)的示意图；图8是本专利技术实施例中免疫组化染色α -SMA (再通模型14天)的示意图；图9是本专利技术实施例中免疫组化染色α -SMA (再通模型21天)的示意图。具体实施例方式下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步详细的说明实施例1 大鼠输尿管弹性塑胶加压结扎梗阻以及再通的动物实验〔一〕材料与方法1.材料健康SPF级雄性SD大鼠24只，体重200士20g，由上海中医药大学实验动 物中心提供。分笼饲养于12h光照，45%左右相对湿度的饲养笼中，自由饮食。弹性塑胶管 由PVC材料自行制作，上海中医药大学附属曙光医院实验动物中心为标准的SPF级实验动 物中心。2.分组和造模第一部分36只SPF级SD雄性大鼠，其中18只SD雄性大鼠接受 左输尿管植入弹性管脂肪垫加压结扎梗阻后，作为模型组，另18只为假手术组。分别于第 7日后接受第二次手术，在第二次手术中，取出植入弹性管，疏通左侧输尿管，从而解除左肾 梗阻，同时将右肾包膜分离，4号线结扎右侧输尿管。术后记录大鼠的生存状况、尿量。分别 于再通术后第7和14日、21日各处死6只模型组大鼠和6只假手术组大鼠，通过腹主动脉 取血，监测肾功能水平，尿β 2微球蛋白，尿NAG，从而了解左肾功能，动态观察肾组织形态 的改变。所有大鼠处死后取出左肾，去除包膜后纵行切开肾脏，进行肾脏大小、肾实质厚度 测量，一部分肾组织固定后进行病理检查、免疫组化染色(α平滑肌动蛋白)。动物自由饮 水、摄食，自然照明，室温喂养。3.模型建立的评价方法和结果3. 1.评价指标3. 1. 1肾功能的测定血肌酐、尿素氮、胱抑素-C用常规生化测定方法检测。3. 1. 2.肾小管功能的测定尿NAG、β 2微球蛋白(β 2_MG)的测定尿β 2_MG、 尿NAG的测定选用上海亚都生物技术经营部提供的尿β 2-MG、NAG含量测定试剂盒，采用 ELISA法，用酶标仪测定，按试剂盒说明进行操作，步骤略。3. 1. 3.大鼠的肾脏病理检测用HE、MASSION、PAS染色，观察肾小球、肾小管和间 质的病理变化。3. 1.本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种单侧输尿管结扎再通动物模型的建立方法，其特征在于：包括如下步骤：１）制备弹性塑胶管；２）ＳＤ雄性大鼠接受左输尿管植入弹性塑胶脂肪垫加压结扎梗阻后，分别于第７日后接受第二次手术，在第二次手术中，取出植入弹性塑胶管，疏通左侧输尿管，从而解除左肾梗阻，同时将右肾包膜分离，４号线结扎右侧输尿管。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：何立群，董飞侠，黄迪，张新志，
申请(专利权)人：上海中医药大学附属曙光医院，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]