使用人器官和／或组织验证物质测试的离体方法技术

本发明专利技术公开了使用来自人的组织和／或器官，特别是不适合移植的组织和／或器官对测试物质的评估结果进行验证的方法，该方法包括评估所述器官和／或组织对物质测试的适宜性以及器官间变异性和外源和／或内源对照的使用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
本专利技术涉及在使用包含物质(诸如化学物质，特别是药物和候选药物)的相容性 灌注液溶液对来自人的离体(ex vivo)器官和/或组织进行灌注时，对此物质的性质、结局 (fate)和作用以及与其接触的器官和/或组织的定性和定量评估结果进行验证的方法，所 述性质、结局和作用例如物质的吸收、转运、代谢、清除、功效和/或毒性。本专利技术的方法允 许使用来自人的器官和/或组织，特别是不适合移植的人器官在器官或组织基础上对所述 评估结果进行验证。 可用于评估物质以及受其影响的人器官和/或组织的方法跨越了从体内研究到 分离器官或组织、组织切片、培养的细胞类型、亚细胞颗粒、多酶复合体和分子相互作用的 研究的多个哺乳动物组织水平。实际上，这些复杂的方法常导致在很多领域中相当多的 时间、精力和资源的浪费，特别是在药物开发中，其中可能对候选药物的安全性和功效进 行多轮检测，而随后的检测或市场体验发现其具有不良影响，这有时会带来惨痛后果。例 如，已经批准用于人，但随后由于毒性事件而被取消的药物包括C0X-2抑制剂、非索非那定 (phexophenadine)禾口沙立度胺(thalidomide)。 在早期临床试验中，不利的效益/风险比常导致在其他方面前景良好的药理活性 物质被否决。此类事件带来惨重损失，并且对药物开发、卫生保健和工业稳定性产生重大影 响。此前，旨在排除效益/风险比不能被接受的物质的尝试依赖于使用如啮齿动物的数种 物种进行的非人动物的体内研究。然而，比较而言，与药物开发中使用的近交系动物不同， 目标物种(即人)在形体和功能上相差很多。因此，诸如候选药物和药物的物质的定量和 定性性质、结局和作用也相差很多。 在非人物种中进行毒性研究的局限性早已得到制药业广泛公认，且目前仍旧如 此，但由于人体内毒性研究的缺乏，而使其没有可行的替代方案。由于使用人进行探索性毒 性试验是违反人道主义的，选择使用多种非人动物物种进行体内试验和/或使用人的生物 样品进行体外试验。曾尝试使用包括亚细胞颗粒(例如微粒体)的组织制品、初代细胞和 培养细胞(如肝细胞)和组织切片来填补非人试验的结果和在人体中作用之间的差距。尽 管这些体外组织制备物产生了非常有用的数据，但是很多候选药物仍由于不利的风险问题 而在临床试验中失败。现有文献有充足的证据表明这至少部分是由于组织制备物与完整生 物体之间的关系越远，出现假阳性和假阴性的几率越大的事实造成的。例如，在单独施用或 与其他药物共同施用治疗剂量的测试物质以评估检测物质是否具有毒性时，可能出现假阳 性或假阴性。认为，当药物化合物由临床前实验转入临床实验，其安全性和功效的可信度提 高。然而，也认为，不可预测的有害结果的风险也随之增大。不能简单地保证在体外正常人 组织中测定的药代动力学/毒理学关系与在病人组织中的体内测定相同。 即便并非不可能，通常也难以从活的人供体获得用于药物开发目的的样品。令人 遗憾的是，来自死亡供体的样品由于可能与供体死亡相关或不相关的疾病和/或损伤，和/ 或由于捐献后不同水平的降解(degradation)而使变异性的潜在和实际水平提高。因此， 一直难以对基于此类人样品的数据进行可信地概括，特别是在药物开发所需的水平上进行5概括。此外，人样品比来自近交系测试动物的样品具有更高的变异性。 美国专利第5， 338， 662号公开了测定测试物质对离体器官的作用的方法。然而，这些方法依赖于与同时灌注的对照器官的比较。尽管此类方法可能适合于具有均一性质和质量的器官，例如来自近交系测试动物的器官，但是这些方法并不能解决在使用人样品时的内在变异性，特别是来自濒死供体(pre-deceased donor)的人样品。 因此，需要能够填补非人动物体内试验和人体施用之间的差距的改进方法用于评价和验证物质评估结果。需要对用于测试物质(例如候选药物)的器官和组织进行标准化验证测试。此外，药物开发工业需要对研发过程早期潜在候选药物的评价结果进行验证的新型改进方法，以为药物开发公司提供可靠的评价结果。
技术实现思路
本专利技术的实施方式完全满足了使用经灌注的组织或器官，优选来自人的组织或器官，更优选经灌注的人器官和器官组(organ set)对物质(如候选药物)的性质、结局和作用以及与其接触的器官和/或组织的评估结果进行验证的需要，所述性质、结局和作用例如物质的吸收、转运、代谢、清除、功效和/或毒性和其他测试。本专利技术的方法提供了获得信息和物质/作用相互关系的改良手段。 本专利技术的实施方式包括用于评估器官或组织对物质测试(substancetesting)的适宜性的方法，所述器官或组织优选人器官或组织，更优选人器官，并且最优选不适合移植的人器官，包括患病或其他缺陷的器官，或者由于特别是长期热缺血、疾病、损伤和/或长期贮存等而使成功移植的可能性低于可接受水平的器官(可在捐献和/或贮存前后进行测定)。 本专利技术的实施方式包括在获取、冷藏和常温灌注后评估器官或组织生理学的方法。在实施方案中，本专利技术提供了评估器官或组织的适宜性的方法，其包括 a)使用不包含测试物质的医用液体灌注至少一种组织或器官；禾口 b)评估所述器官或组织对物质测试的适宜性。 优选所述器官或组织是人器官或组织。 优选在生理温度、压力、氧合作用、渗透压、电解质平衡和pH下灌注所述器官或组织。 在实施方式中，通过评估灌注液、排泄/分泌液和/或组织样品，从而基于生理学、缺血损伤和/或再灌注损伤来评估适宜性。 在实施方式中，为了获取器官或组织变异性和/或评价测试物质的性质、结局和作用，本专利技术还提供了离体方法，其包括 c)在至少一种测试物质存在下使用医用液体灌注至少一种器官或组织；禾口 d)评估所述器官或组织的目标性质或作用，例如变异性和/或测试物质在所述器官或组织的吸收、转运、代谢、清除、功效和/或毒性，其中可以通过在整个灌注过程中定量监测内源组分来评估变异性。也可以或者可选地在添加测试物质之前、期间和/或之后添加外源对照，以进行此类评估。 本专利技术提供的方法有利地避免了在使用非人动物模型模拟人体内活性和行为时遇到的，测试物质的吸收、转运、代谢、清除、功效、泰性、组织易感性和其他性质和/或作用方面的物种固有差别。此外，可使潜在高度变异的经灌注人器官或组织在生理条件下和所述器官或组织中所有细胞类型的临床相关浓度下接触物质诸如药物或候选药物及其代谢物，从而提供更为可信、准确和一致的结果。 可通过在添加候选药物之前、期间和/或之后添加并监测外源对照，和/或通过在整个灌注过程中监测内源组分，来将用于离体评估对物质测试的适宜性的人器官和组织充当其自身对照。这样，可以将产生的关于物质(例如候选药物)在来自不同供体的相应器官或组织中的性质、结局和作用的数据标准化，而不是反映个体变异性。 本专利技术的实施方式可用于评估物质的方法中，所述方法包括使待评价的物质通过具有代谢活性的人器官或组织，收集来自所述器官或组织的数据，和使用所收集的数据评价所述物质。 在实施方式中，所述评价是政府和/或监管批准程序的一部分；通过评价包含所述物质并且流出所述器官或组织的灌注液，或者通过评价采自于所述器官或组织的活检物来收集数据。 在本专利技术的实施方式中，所述评价方法包括使第二物质在所述第一物质之后通本文档来自技高网...

【技术保护点】
使用至少一种人器官或组织验证物质测试结果的方法，所述人器官或组织选自由已经从其来源永久去除的具有代谢活性的人器官或组织和源自分离的和／或培养的人细胞的工程化器官或组织组成的组，所述方法包括：（ａ）在施用测试物质之前评估所述人器官或组织对测试的适宜性；（ｂ）使用包含所述测试物质的灌注液灌注所述器官或组织；（ｃ）评估与所述测试物质相关的参数；和（ｄ）在施用所述测试物质期间和／或之后评估所述器官或组织对测试与所述测试物质相关的所述参数的适宜性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：克里斯多佛杰拉尔德柯蒂斯，约翰布拉塞尔，大卫克拉维茨，
申请(专利权)人：生命线科学公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]