烟曲霉ERA/CRISPR-Cas12a快速检测方法的建立及应用技术

本发明专利技术提供了烟曲霉ERA/CRISPR‑Cas12a快速检测方法的建立及应用，本发明专利技术还提供了相应的试剂盒以及检测烟曲霉的方法。本发明专利技术首次建立了ERA(Enzymatic Recombinase Amplification)结合CRISPR/Cas12a的快速检测体系，通过优化反应体系，提升一锅法的灵敏度，其荧光检测限为1fg/μL，试纸条检测灵敏度可达10fg/μL，且不与其他细菌、真菌发生交叉反应。60min内可完成对烟曲霉的检测，检测结果通过荧光和核酸试纸条直观反映。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体地说，本专利技术涉及烟曲霉era/crispr-cas12a快速检测方法的建立及应用。

技术介绍

1、真菌广泛分布于自然界中，正常情况下由于人体免疫力的存在，一般不会引起感染，但是当免疫力低下时，真菌感染的风险大大增加。烟曲霉是一种在土壤和堆肥中发现的腐生丝状真菌，也是人类、鸟类和其他哺乳动物多种肺部疾病的病原体，它通过无性孢子形成传播，是造成侵袭性曲霉病的主要病原体，通常发生在新生儿和老人等免疫力的人群。目前医院采用真菌纯培养与镜检相结合对曲霉病进行诊断，诊断特异性虽高，但耗时过长；gm试验是针对半乳甘露聚糖进行检测，在临床应用中多在疑似活动性疾病的患者血液和支气管肺泡灌洗液中进行半乳甘露聚糖的检测，采取bal检测比血清检测敏感性更高，但该检测的假阳性较高；分子生物学诊断方法包括聚合酶链式反应(pcr)和实时荧光定量pcr，具有很强的特异性，但是，pcr技术的运用需要专业的设备和操作熟练的人员，对于医疗设备不够完善的偏远地区，这项技术不易开展。因此，开发一种快速、准确且适用于基层医疗机构的烟曲霉检测方法具有重要的临床意义。

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【技术保护点】

1.一种两步法用于检测烟曲霉的检测体系，其特征在于，所述检测体系包括：

2.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，Cas12蛋白的浓度为150-500nM，较佳地，200-400nM，更佳地，200-300nM。

3.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，Cas12蛋白的工作温度为35-40℃，优选35-38℃。

4.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述检察体系还含有待检测的烟曲霉的核酸分子。

5.如权利要求4所述的检测体系，其特征在于，所述烟曲霉的核酸分子为经过等温扩增的核酸分子。

6.一种一管两步法用于检测烟曲霉...

【技术特征摘要】

1.一种两步法用于检测烟曲霉的检测体系，其特征在于，所述检测体系包括：

2.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，cas12蛋白的浓度为150-500nm，较佳地，200-400nm，更佳地，200-300nm。

3.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，cas12蛋白的工作温度为35-40℃，优选35-38℃。

4.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述检察体系还含有待检测的烟曲霉的核酸分子。

5.如权利要求4所述的检测体系，其特征在于，所述烟曲霉的核酸分子为经过等温...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐大勇，李峰，蒋邱阳，
申请(专利权)人：淮北师范大学，
类型：发明
国别省市：