同时检测鲈鳜鱼虹彩病毒、传染性脾肾坏死病毒、弹状病毒的三重荧光定量PCR的引物组和探针及试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及同时检测鲈鳜鱼虹彩病毒、传染性脾肾坏死病毒、弹状病毒的三重荧光定量PCR的引物组和探针及试剂盒，属于分子生物学检测技术领域。本发明专利技术提供了一种同时检测鲈鳜鱼虹彩病毒、传染性脾肾坏死病毒、弹状病毒的引物组和探针，并构建了同时检测RanaV(LMBV/MRV)、ISKNV和PFRV(MSRV/SCRV)的三重荧光定量PCR方法，该方法灵敏度高、特异性强、操作简单、快速高效，检测过程1h，可满足同时检测大口黑鲈虹彩病毒(LMBV)、鳜鱼虹彩病毒(MRV)、传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)、大口黑鲈弹状病毒(MSRV)、鳜鱼弹状病毒(SCRV)五种病原。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学检测，尤其涉及同时检测鲈鳜鱼虹彩病毒、传染性脾肾坏死病毒、弹状病毒的三重荧光定量pcr的引物组和探针及试剂盒。

技术介绍

1、大口黑鲈(1argemouth bass、micropterus salmoides)和鳜鱼(mandarinfish、siniperca chuatsi)同为鲈形目(perciformes)经济鱼类，均具有生长快、肉质鲜美、蛋白含量高、无肌间刺、营养丰富等优点，深受广大消费者喜爱。近年随着市场需求旺盛，鲈鳜鱼养殖获得了迅猛发展，从过去的年产量十几万吨到目前的几十万吨；尤其是陆基圆池养殖模式的兴起，鲈鳜鱼作为陆基圆池适养品种，其养殖量仍会大幅增长。但随着鲈鳜鱼养殖业的迅速发展，由于种质退化、养殖环境污染加剧、病原微生物滋生导致病害频发，其中危害最为严重的是由鲈鳜鱼虹彩病毒(largemouth bass virus/mandarin fish ranavirus，lmbv/mrv)、传染性脾肾坏死病毒(infectious spleen and kidney necrosis virus,isknv)、弹状病本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种同时检测鲈鳜鱼虹彩病毒、传染性脾肾坏死病毒、弹状病毒的引物组和探针，其特征在于，扩增虹彩病毒的引物探针包括上游引物RanaV-qF、下游引物RanaV-qR和探针RanaV-qP；扩增传染性脾肾坏死病毒的引物探针包括上游引物ISKNV-qF、下游引物ISKNV-qR和探针ISKNV-qP；扩增弹状病毒的引物探针包括上游引物PFRV-qF、下游引物PFRV-qR和探针PFRV-qP；

2.权利要求1所述的引物组和探针在制备同时检测鲈鳜鱼虹彩病毒、传染性脾肾坏死病毒、弹状病毒的检测试剂盒中的应用。

3.一种基于权利要求1所述的引物组和探针的试剂盒，其特征在于，...

【技术特征摘要】

1.一种同时检测鲈鳜鱼虹彩病毒、传染性脾肾坏死病毒、弹状病毒的引物组和探针，其特征在于，扩增虹彩病毒的引物探针包括上游引物ranav-qf、下游引物ranav-qr和探针ranav-qp；扩增传染性脾肾坏死病毒的引物探针包括上游引物isknv-qf、下游引物isknv-qr和探针isknv-qp；扩增弹状病毒的引物探针包括上游引物pfrv-qf、下游引物pfrv-qr和探针pfrv-qp；

2.权利要求1所述的引物组和探针在制备同时检测鲈鳜鱼虹彩病毒、传染性脾肾坏死病毒、弹状病毒的检测试剂盒中的应用。

3.一种基于权利要求1所述的引物组和探针的试剂盒，其特征在于，包括反应液、标准品、阳性对照和阴性对照。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述反应液包括2×fast one stepprobe rt-qpcr mix，上游引物ranav-qf和下游引物ranav-qr，探针ranav-qp，上游引物isknv-qf和下游引物isknv-qr，探针isknv-qp，上游引物pfrv-qf和下游引物pfrv-qr，探针pfrv-qp，灭菌depc水。

5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述反应液共2.7ml；每份反应液为27μl，包括2×fast one step probe rt-qpcr mix 15μl，10μmol/l上游引物ranav-qf和10μmol/l下游引物ranav-qr各0.6μl，5μmol/l探针ranav-qp 0...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭红连，童桂香，韦剑成，韦信贤，杨明伟，黄世昆，苏美珍，李莉萍，陈静，雷爱莹，
申请(专利权)人：广西壮族自治区水产科学研究院广西壮族自治区渔业病害防治环境监测和质量检验中心，广西壮族自治区水生野生动物救护中心，
类型：发明
国别省市：