【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物，具体涉及基于甲基化敏感限制性内切酶的文库污染特异性降解方法及试剂盒。
技术介绍
1、基于甲基化敏感限制性内切酶的文库污染特异性降解方法在现有技术中的原理是利用甲基化敏感限制性内切酶对特定甲基化状态的dna序列特异性识别和切割来降解文库污染。首先，对生物样本中的基因组dna进行提取与片段化处理，接着让甲基化敏感限制性内切酶发挥作用，该酶只切割未甲基化的dna序列而不影响甲基化的部分。之后进行文库构建，涵盖末端修复、接头连接等操作，再用特异性探针杂交捕获目标dna序列，通过洗脱和纯化去除非特异性结合的dna以得到纯净文库，最后用仪器检测文库质量确保符合要求。
2、然而现有技术存在一些问题，例如酶切效率问题和试剂盒稳定性和重复性问题。甲基化敏感限制性内切酶的酶切效率需要进一步优化，以确保所有未甲基化的dna序列都能被有效切割，避免未切割的污染dna影响后续实验结果。尽管甲基化敏感限制性内切酶对特定甲基化状态的dna序列具有特异性，但在实际应用中，可能存在对甲基化状态的误判，导致部分甲基化的dna也被切割或未甲基化的...
【技术保护点】
1.一种基于甲基化敏感限制性内切酶的文库污染特异性降解方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述酶切文库污染物步骤中，将所述文库反应体系在35°C-39°C的温度下孵育0.5-1.5小时，随后在60°C-70°C的温度下孵育15-25分钟，以获得酶切后的DNA文库反应体系。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述确定甲基化敏感限制性内切酶的识别位点包括如下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述甲基化差异位点通过公式M = log2((β + α)/(1 - β ...
【技术特征摘要】
1.一种基于甲基化敏感限制性内切酶的文库污染特异性降解方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述酶切文库污染物步骤中，将所述文库反应体系在35°c-39°c的温度下孵育0.5-1.5小时，随后在60°c-70°c的温度下孵育15-25分钟，以获得酶切后的dna文库反应体系。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述确定甲基化敏感限制性内切酶的识别位点包括如下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述甲基化差异位点通过公式m = log2((β + α)/(1 - β + α))进行确定，其中，m为甲基化强度，β为甲基化比例，α为防止分母为零的平滑因子，且α的取值范围为0.001至0.01。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘骁，王海波，贾志臣，骆奕晨，郭品，周芷俊，
申请(专利权)人：上海金福康制药工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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