融合蛋白、调控系统及利用该系统构建转基因细胞的方法技术方案

本发明专利技术公开了一种融合蛋白、调控系统及利用该系统构建转基因细胞的方法，属于生物技术领域。通过将FKBP12突变体形成的不稳定结构域(Destabilizing Domain，DD)与IFP2转座酶融合，利用小分子配体Shield‑1实现对转座酶活性的精确调控。本发明专利技术提供了DD与IFP2形成即保留转座酶生物活性，又能被配体条件性调控稳定性特点的融合蛋白构建方法、调控系统及构建转基因细胞的方法，具有外源基因整合效率高、安全性好、可精确调控等优势，还可广泛应用于转基因细胞、转基因动物模型构建、细胞治疗等领域。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体的说，涉及一种融合蛋白、包含该融合蛋白的调控系统以及利用调控系统构建转基因细胞的方法。

技术介绍

1、利用哺乳动物细胞生产重组糖蛋白的技术，已经深度融入生物制药产业链，如重组抗体、重组疫苗抗原和治疗性药物等，建立稳定高产的基因工程重组细胞系和多级细胞库是进行生物制品稳定规模化生产的前提和基础。然而在自然条件下，外源基因稳定整合到宿主细胞基因组的效率较低，随机性强，筛选稳定高表达的单克隆来源细胞系是一件耗时耗力的工作。

2、转座酶是一类能够催化转座子dna片段在基因组中移动并整合的酶，在基因编辑和转基因技术中具有重要应用价值。ifp2 (又被称为piggybac) 转座酶是是从粉纹夜蛾中分离得到的一种转座酶，一方面它可以更高效地将两端携带有不对称的、被ifp2识别的末端反向重复序列（itrs）的外源基因表达框（转座子）插入到细胞基因组的ttaa目标位点，更重要的是它可以将完整地将特定长度的外源基因表达框插入细胞基因组，避免了自然重组过程中随机打断外源片段后进行的基因组整合，进而减少了基因组整合外源基因后蛋白表达缺陷的不确定本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种DD-IFP2融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包含FKBP12突变体形成的不稳定结构域DD12和IFP2转座酶；所述FKBP12突变体为F36V和/或L100G，其氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示；所述IFP2为野生型序列或经过突变的高活性PiggyBac，所述IFP2转座酶氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；不稳定结构域位于IFP2蛋白的N端，其间用柔性连接肽连接，所述的DD-IFP2融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，柔性连接肽的氨基酸序列如SEQ IDNO.4所示。

2.一种调控 IFP2 转座酶活性的系统，其特征在于，所述系统包括： (...

【技术特征摘要】

1.一种dd-ifp2融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包含fkbp12突变体形成的不稳定结构域dd12和ifp2转座酶；所述fkbp12突变体为f36v和/或l100g，其氨基酸序列如seq idno.1所示；所述ifp2为野生型序列或经过突变的高活性piggybac，所述ifp2转座酶氨基酸序列如seq id no.2所示；不稳定结构域位于ifp2蛋白的n端，其间用柔性连接肽连接，所述的dd-ifp2融合蛋白的氨基酸序列如seq id no.3所示，柔性连接肽的氨基酸序列如seq idno.4所示。

2.一种调控 ifp2 转座酶活性的系统，其特征在于，所述系统包括： (a) 表达权利要求1所述 dd-ifp2 融合蛋白的载体； (b) 包含待转座基因和转座酶识别位点的供体质粒；(c) 用于稳定 dd-ifp2 融合蛋白的小分子配体。...

【专利技术属性】
技术研发人员：寸韡，车艳春，罗舒红，邹秋萍，杨照鹏，李光洲，
申请(专利权)人：云南彤宁生物制药技术有限公司，
类型：发明
国别省市：