一种基于IL2启动子的报告基因细胞系及其构建与应用制造技术

本发明专利技术公开了一种基于IL2启动子的报告基因细胞系及其构建与应用，属于生物技术领域。本发明专利技术通过在改造的miniaml IL2启动子的上游插入多拷贝的NFAT、AP‑1和NF‑κB核蛋白结合位点基因，在其下游连接改造的荧光素酶报告基因，通过慢病毒包装感染Jurkat细胞，得到基于IL2启动子的报告基因细胞系，进一步地通过检测该基于IL2启动子的报告基因细胞系中的荧光素酶报告基因的表达量，从而对T细胞的活化进行高效、快速检测；另外，该基于IL2启动子的报告基因细胞系可以用于筛选靶向T细胞通路激活的药物，或者用于制备监测IL2启动子激活和/或抑制的模型，因此，具有较好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及一种基于il2启动子的报告基因细胞系及其构建与应用。

技术介绍

1、t细胞在细胞介导的免疫中起着核心作用，能够介导长期、抗原特异性的效应和记忆反应。近年来，针对t细胞反应的诱导、增强及工程化改造的免疫疗法已成为癌症、自身免疫病等疾病治疗的前沿方向。t细胞的活化机制涉及多层级信号整合：首先，t细胞抗原受体（tcr）/cd3复合物与抗原肽-mhc复合物（pmhc）的特异性结合触发第一信号，决定免疫应答的特异性；其次，共刺激分子（如cd28与b7家族）的相互作用提供第二信号，增强tcr信号强度并促进il-2分泌；第三，细胞因子（如il-2、il-12）通过受体结合激活下游通路，形成第三信号，驱动t细胞增殖与功能分化。

2、当t细胞抗原受体（tcr）/cd3复合物与共刺激受体cd28结合后，细胞表面这些受体的同时结合会引发细胞内信号传导事件，并激活核转录因子，如活化t细胞核因子（nuclearfactor of activated t cells，nfat）、nf-κb和ap-1。tcr/cd3复合物的结合会导致plc-γ的本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于IL2启动子的报告基因细胞系的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

2. 根据权利要求1所述的基于IL2启动子的报告基因细胞系的构建方法，其特征在于，步骤S1中，所述多拷贝NFAT基因、所述多拷贝AP-1基因、所述多拷贝NF-κB基因均为五拷贝，并且其核苷酸序列分别如SEQ ID NO: 1-3所示。

3. 根据权利要求1所述的基于IL2启动子的报告基因细胞系的构建方法，其特征在于，步骤S1中，所述Minimal IL-2启动子基因、所述荧光素酶基因和所述Fast基因的核苷酸序列分别如SEQ ID NO: 4-6所示。

4.根据权利要求1所...

【技术特征摘要】

1.一种基于il2启动子的报告基因细胞系的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

2. 根据权利要求1所述的基于il2启动子的报告基因细胞系的构建方法，其特征在于，步骤s1中，所述多拷贝nfat基因、所述多拷贝ap-1基因、所述多拷贝nf-κb基因均为五拷贝，并且其核苷酸序列分别如seq id no: 1-3所示。

3. 根据权利要求1所述的基于il2启动子的报告基因细胞系的构建方法，其特征在于，步骤s1中，所述minimal il-2启动子基因、所述荧光素酶基因和所述fast基因的核苷酸序列分别如seq id no: 4-6所示。

4.根据权利要求1所述的基于il2启动子的报告基因细胞系的构建方法，其特征在于，步骤s2中，所述慢病毒载体包括pcdh-puro载体。

5.根据权利要求1所述的基于il2启动子的报告基因细胞系的构建方法，其特征在于，步骤s3中，所述包装具体包括：将所述重组慢病毒载体与包装质粒pspax2和包膜质粒pmd2.g混合，得到混合质粒；向所述混合质粒中加入pei40k转染剂，混合均匀后，加入到hek293t细胞中，经培...

【专利技术属性】
技术研发人员：王静，易汪雪，梁宇，王营，王永祥，于倩，
申请(专利权)人：武汉华美生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：