一种从中药干品中提取细胞外囊泡的方法技术

本发明专利技术实施例公开了一种从中药干品中提取细胞外囊泡的方法。所述方法包括：以中药干品为原料，依次经粉碎、浸泡、第一次序酶解、破壁、差速离心、第二次序酶解、高速离心、超速离心、超滤富集，得到所述细胞外囊泡。本发明专利技术在酶解过程中采用两步酶解法，通过次序差异酶解方式最大限度的除去杂质，保护外泌体的结构以及功能的稳定性。本发明专利技术差速离心和酶解法交替使用，对大小不一，性质不一的杂质去除更加彻底。本发明专利技术成本控制严格，纯化外泌体效率较高，获取干品外泌体浓度较高，具有极强的可操作性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术实施例涉及外囊泡制备，具体涉及一种从中药干品中提取细胞外囊泡的方法。

技术介绍

1、细胞外囊泡是一种通过细胞产生代谢转运的含有丰富物质的细胞产生物，其中含有丰富的核酸、蛋白质、脂质和各种分子成分，这些成分部分被证明是该种生物所特有，具有极高的研发价值，现在被作为细胞间通信的关键媒介。植物外囊泡作为细胞外囊泡的一种，具有作为天然产物所具有的独特的靶向性、安全性，同时具有成本低、获取难度较小的优势。

2、中医药是历经了几千年检验的医学，而中药在使用上也具有各种各样的方式，有熏蒸、有直接服用、有浓缩成丸使用，同时中药材炮制的方式也有很多，在临床上具有广泛的应用，而中药材在使用中最重要的方式就是干品煎煮成汤，而炮制和煎煮的方式也是使药品成分浓缩的有效方式。实验证明干品也可以提取出外囊泡，这表明这种具有较强稳定性的外囊泡有可能具有中药的很多成分，具有极强的研究价值。

3、目前植物外囊泡提取技术原理大多延袭动物外囊泡，鲜品植物外囊泡大多采用的是破壁方式进行粗提，提取效果根据植物种类的不同，同一方式往往效果存在差异性，所以针对不同种类植本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种从中药干品中提取细胞外囊泡的方法，其特征在于，以中药干品为原料，依次经粉碎、浸泡、第一次序酶解、破壁、差速离心、第二次序酶解、高速离心、超速离心、超滤富集，得到所述细胞外囊泡。

2.根据权利要求1所述的从中药干品中提取细胞外囊泡的方法，其特征在于，粉碎后的药材粒径为48μm-150μm。

3.根据权利要求1所述的从中药干品中提取细胞外囊泡的方法，其特征在于，所述浸泡的条件为：粉碎后的药材按照液料比1:10-50加入磷酸盐缓冲溶液，浸泡30min。

4.根据权利要求1所述的从中药干品中提取细胞外囊泡的方法，其特征在于，以10g-50g中药干品为基...

【技术特征摘要】

1.一种从中药干品中提取细胞外囊泡的方法，其特征在于，以中药干品为原料，依次经粉碎、浸泡、第一次序酶解、破壁、差速离心、第二次序酶解、高速离心、超速离心、超滤富集，得到所述细胞外囊泡。

2.根据权利要求1所述的从中药干品中提取细胞外囊泡的方法，其特征在于，粉碎后的药材粒径为48μm-150μm。

3.根据权利要求1所述的从中药干品中提取细胞外囊泡的方法，其特征在于，所述浸泡的条件为：粉碎后的药材按照液料比1:10-50加入磷酸盐缓冲溶液，浸泡30min。

4.根据权利要求1所述的从中药干品中提取细胞外囊泡的方法，其特征在于，以10g-50g中药干品为基准，所述第一次序酶解的条件为：加入纤维素酶0.15g-0.25g，酶活为3500u/g，在25℃酶解4-12h；接着加入木质素过氧化氢酶0.01g-0.025g，酶活为100000u/g，在37℃酶解4-12h；最后加入纤维二糖酶0.5g-1g，酶活为200u/g，在37℃酶解4-12h。

5.根据权利要求1所述的从中药干品中提取细胞外囊泡的方法，其特征在于，所述破壁的条件为：破壁功率为1000w，转速为36000rpm，温度保持在4℃。

6.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：王东，吴佩杰，许欢，文跃强，邵冰杰，冯奕源，
申请(专利权)人：成都中医药大学，
类型：发明
国别省市：