一种利用抗凝血储运液制备脐带间充质干细胞的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用抗凝血储运液制备脐带间充质干细胞的方法，涉及脐带组织保存处理技术领域，包括以下步骤：S1、将采集的脐带组织置于含有抗凝血储运液的储运瓶中；S2、取出脐带组织，使用所述抗凝血储运液冲洗外表面并剪除两端；S3、将脐带剪成1～3cm小段冲洗；S4、剖离血管并去除羊膜，撕取华通胶剪成小块；S5、将组织块平铺于培养瓶中原代培养；S6、培养第6天更换培养基，第12天消化传代收集P0代细胞进行细胞计数和活率检测，将P0代细胞培养至P1代，通过在脐带组织储运及脐带间充质干细胞分离制备过程中使用储运液，从而降低了脐带组织中血液凝集、染菌的风险，可有效去除溶解已经凝集的血块，提高了脐带间充质干细胞的细胞数量及活率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及脐带组织保存处理，更具体地说，本专利技术涉及一种利用抗凝血储运液制备脐带间充质干细胞的方法。

技术介绍

1、脐带间充质干细胞是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，具有自我更新和多项分化潜能，能够分化成成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、内皮细胞等多种细胞。具有较强的增殖能力和免疫原性低等特点，因此其具有广阔的临床应用前景。

2、但是脐带间充质干细胞通常由脐带华通胶分离而来，在脐带采集过程中脐带组织内容易残留血液，经长时间储运后容易形成凝血。这些凝血块的存在导致了一系列严重问题：凝血块阻碍氧气和营养物质向组织细胞（包括目标干细胞）的扩散，同时代谢废物也难以排出，导致局部微环境恶化，直接影响干细胞的活力和后续的增殖分化潜能；凝血块为细菌、病毒等微生物提供了良好的附着和繁殖基质，显著增加了在储运和后续操作过程中发生生物污染的风险；凝血块增加了脐带组织的黏滞性，使其结构变得粘连不清，严重干扰了后续对血管、羊膜等结构的剥离操作以及华通胶的纯净获取，增加了操作难度和损伤风险，并可能降低最终获得干细胞的纯度；现有技术中为了移除已形成的凝血块，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种利用抗凝血储运液制备脐带间充质干细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种利用抗凝血储运液制备脐带间充质干细胞的方法，其特征在于：所述抗凝血储运液包括PBS缓冲液、葡萄糖、20%人血白蛋白、肝素钠、纳豆激酶、青霉素和链霉素。

3.根据权利要求2所述的一种利用抗凝血储运液制备脐带间充质干细胞的方法，其特征在于：所述PBS缓冲液用量为90～110ml，所述葡萄糖用量为1g～15g、所述20%人血白蛋白用量为1ml～20ml、所述肝素钠用量为5～100mg、所述纳豆激酶用量为2000FU-6000FU、所述青霉素用量为0.5mg～2.5...

【技术特征摘要】

1.一种利用抗凝血储运液制备脐带间充质干细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种利用抗凝血储运液制备脐带间充质干细胞的方法，其特征在于：所述抗凝血储运液包括pbs缓冲液、葡萄糖、20%人血白蛋白、肝素钠、纳豆激酶、青霉素和链霉素。

3.根据权利要求2所述的一种利用抗凝血储运液制备脐带间充质干细胞的方法，其特征在于：所述pbs缓冲液用量为90～110ml，所述葡萄糖用量为1g～15g、所述20%人血白蛋白用量为1ml～20ml、所述肝素钠用量为5～100mg、所述纳豆激酶用量为2000fu-6000fu、所述青霉素用量为0.5mg～2.5mg、所述链霉素用量为0.5mg～2.5mg。

4.根据权利要求2所述的一种利用抗凝血储运液制备脐带间充质干细胞的方法，其特征在于：所述pbs缓冲液的配制方法为：

5.根据权利要求2所述的一种利用抗凝血储运液制备脐带间充质干细胞的方法，其特征在于：所述抗凝血储运液的配制方法如下：

6.根据权利要求1所述的一种利用抗凝血储运液制...

【专利技术属性】
技术研发人员：李盼，张百峰，罗广震，赵丹丹，李晶晶，田艳玲，李芬，马雪娇，李世香，刘萍，
申请(专利权)人：山东水发生命科学研究有限公司，
类型：发明
国别省市：