一种溶组织梭菌胶原酶的发酵及纯化方法技术

技术编号：46355268 阅读：7 留言：0更新日期：2025-09-15 12:35

本发明专利技术涉及溶组织梭菌胶原酶的发酵和纯化技术领域，公开了一种溶组织梭菌胶原酶的发酵及纯化方法，包括以下步骤：步骤1：将溶组织梭菌按2％接种量接种于增菌培养基中，所述增菌培养基包含牛肉膏1g/L、蛋白胨1g/L、酵母粉1g/L、明胶3g/L、超纯水100mL，pH为7.4‑7.6；步骤2：在所述增菌培养基中加入50.5μLFe2+和500μLCa2+；步骤3：于厌氧条件下37℃发酵培养24h，离心获取发酵上清液。本发明专利技术通过确定37℃为最佳发酵温度、1％氮源浓度以及24小时发酵时间，并创新性地引入2.8mg/100mLFe2+和10.0mmol/LCa2+作为关键添加剂，获取高表达量和高酶活的溶组织梭菌胶原酶，使胶原酶活性(A～345～)从0.790U/L提升至0.903U/L，同时保持了40‑45mg/mL的高蛋白浓度，其能够在较短时间内消化小鼠肝胆组织，提取胆管细胞进行类器官培养。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及溶组织梭菌胶原酶的发酵和纯化，特别涉及一种溶组织梭菌胶原酶的发酵及纯化方法。

技术介绍

1、胶原酶是基质金属蛋白酶(mmp)家族中的一个群体，它具有高度特异性，能够在胶原蛋白分子的三螺旋区域引起水解裂解。与哺乳动物在单个位点裂解胶原螺旋结构相反，细菌胶原酶沿着多个位点进行攻击裂解。在各类合成胶原酶的菌株中，溶组织梭菌(clostridium histolyticum)的效率最高，并且产生胶原酶的活性较高，毒性较低，因此是制备胶原酶的首选。与其他蛋白酶相比，胶原酶在很高浓度下能够和细胞一起温育更长时间，而不降低细胞存活率。纯化的胶原酶可用于类器官的消化，例如：小鼠肝胆组织消化。溶组织梭菌胶原酶对于组织消化以及降解细胞外基质中的成分是极其有效的，经过胶原酶处理后的器官，获得的各类型细胞不仅能够保持完整的功能和形状，而且有较高的存活率。目前已有很多生物技术公司将从溶组织梭菌等微生物的上清中提取、纯化到的胶原酶作为商品出售。

2、现有技术中，得到的胶原酶的活性及表达量较低，且价格较高，不适合扩大化生产。本专利技术深入研...

【技术保护点】

1.一种溶组织梭菌胶原酶的发酵方法，其特征在于：包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的溶组织梭菌胶原酶的发酵方法，其特征在于：所述增菌培养基在配置完成后，调节其pH至7.5以下，然后在温度121℃下灭菌30min。

3.根据权利要求1所述的溶组织梭菌胶原酶的发酵方法，其特征在于：所述Fe2+以FeSO4·7H2O的形式加入增菌培养基中，其在增菌培养基中的终浓度范围为1.0-5.6mg/100mL。

4.根据权利要求3所述的溶组织梭菌胶原酶的发酵方法，其特征在于：所述增菌培养基中Fe2+的终浓度范围为2-5mg/100mL。