一种准确定量土壤氮循环微生物酶活性的方法技术

本发明专利技术公开了一种准确定量土壤氮循环微生物酶活性的方法，属于环境研究领域，包括以下步骤：首先，配置土壤蛋白提取液按照适当比例加入土壤中，按步骤提取并富集土壤总蛋白；然后，将提取的总蛋白定量、酶解、除盐后采用质谱仪在进行DIA数据采集，最后建立与微生物氮循环相关的蛋白序列与微生物数据库，输入Spectronaut 19软件后对数据进行搜库分析，鉴定输出氮循环蛋白酶种类及丰度。本发明专利技术的方法在DIA宏蛋白测序方法的基础上，定量了土壤中氮循环微生物酶活性的相对丰度。本方法可规避传统宏基因组、宏转录组等核酸检测方法中基因表达与酶活性不匹配的缺陷，精准反映硝化、反硝化等过程的实时酶活性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于环境研究领域，涉及一种准确定量土壤氮循环微生物酶活性的方法。

技术介绍

1、土壤作为活性氮的重要汇及n2o的重要源，在环境领域中被广泛关注。氮循环微生物通过生物酶催化的硝化过程(氨氧化过程)、反硝化过程、硝酸盐异化还原为铵(dnra)过程以及氮同化过程驱动土壤中nh4+、no3-、有机氮和副产物n2o等之间的相互转化准确定量氮代谢过程中执行功能的酶活性有助于揭示不同生态系统更深入的土壤氮循环机制，有助于优化农业施肥管理和提高氮素利用效率，同时对制定精准的温室气体减排策略具有重要的科学价值与实践意义。

2、土壤中氮循环微生物基因存量的研究具有悠久历史。2005年，tringe等人利用宏基因组学技术，对微生物dna进行分析，首次系统比较了不同环境(包括土壤、海洋和酸性矿山排水)的微生物群落，并检测到与氮循环相关的功能基因(如固氮、硝化等基因)，该研究标志着高通量测序技术应用于土壤氮循环微生物基因组研究的开端(chen et al.,2015)。然而，基于dna层面分析的宏基因组技术对土壤生物与基因存量的研究具有局限性，仅适合于区域性调本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种准确定量土壤氮循环微生物酶活性的方法，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种准确定量土壤氮循环微生物酶活性的方法，其特征在于：所配置的土壤蛋白提取试剂为：1mM苯甲基磺酰氟、150mM氯化钠、0.1mM乙二胺四乙酸、1mM氯化镁、50mM二硫代硫醇、5％(w/v)十二烷基硫钠溶解于Tris-HCl缓冲液的蛋白提取液，使用浓盐酸调节pH为8.5。

3.根据权利要求1所述的一种准确定量土壤氮循环微生物酶活性的方法，其特征在于：土壤样品为大豆、花生、大麦土壤时，培养时间为72小时，孵育时间为60分钟。

4.根据权利要求1所述的一种准确定量土壤氮...

【技术特征摘要】

1.一种准确定量土壤氮循环微生物酶活性的方法，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种准确定量土壤氮循环微生物酶活性的方法，其特征在于：所配置的土壤蛋白提取试剂为：1mm苯甲基磺酰氟、150mm氯化钠、0.1mm乙二胺四乙酸、1mm氯化镁、50mm二硫代硫醇、5％(w/v)十二烷基硫钠溶解于tris-hcl缓冲液的蛋白提取液，使用浓盐酸调节ph为8.5。

3.根据权利要求1所述的一种准确定量土壤氮循环微生物酶活性的方法，其特征在于：土壤样品为大豆、花生、大麦土壤时，培养时间为72小时，孵育时...

【专利技术属性】
技术研发人员：祝贵兵，张艳婷，
申请(专利权)人：中国科学院生态环境研究中心，
类型：发明
国别省市：