一种草鱼来源的U6启动子及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种草鱼来源的U6启动子，序列如SEQ ID NO:1‑3之一所示。本发明专利技术克隆了3个草鱼来源的U6启动子并对其转录活性和跨物种适应性进行分析，结果显示，这三个启动子在鱼类细胞和人源细胞中均能表现出转录活性，其中ciU6‑1的转录活性显著高于另外两者，可在多种细胞中转录异源DNA，并且可用于基于Cas9的基因编辑手段。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种草鱼来源的u6启动子及其应用。

技术介绍

1、基于成簇规律间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced shortpalindromic repeats,crispr)及其相关蛋白(crispr-associated，cas)的crispr/cas系统使基因编辑技术步入了一个崭新的时代。其中得到最广泛应用的是crispr/cas9系统，主要由cas9核酸内切酶和向导rna(single guide rna，sgrna)构成。通过设计特异性的sgrna，该系统可以在目标dna序列处进行切割，从而产生双链断裂，随后通过非同源末端连接或同源重组修复机制实现基因组编辑。

2、crispr/cas9技术作为一种革命性的基因编辑工具，其有效实施不仅依赖于cas9蛋白的精确切割能力，还在很大程度上依赖于sgrna的高效表达。在实际应用中，一般利用专门设计的启动子(如u6启动子、h1启动子或用于体外转录的t7启动子等)驱动sgrna的表达。成熟的sgrna携带特定的靶向序列，与ca本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种草鱼来源的U6启动子，其特征在于，序列如SEQ ID NO:1-3之一所示。

2.一种基因表达盒，其特征在于，包括权利要求1所述的U6启动子和由所述U6启动子驱动的目的基因。

3.根据权利要求2所述的基因表达盒，其特征在于，所述目的基因位于所述U6启动子下游。

4.一种用于表达目的基因的表达质粒，其特征在于，包括权利要求2或3所述的基因表达盒。

5.权利要求1所述的U6启动子、权利要求2或3所述的基因表达盒或者权利要求4所述的表达质粒在对细胞进行遗传操作中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述遗传操作为...

【技术特征摘要】

1.一种草鱼来源的u6启动子，其特征在于，序列如seq id no:1-3之一所示。

2.一种基因表达盒，其特征在于，包括权利要求1所述的u6启动子和由所述u6启动子驱动的目的基因。

3.根据权利要求2所述的基因表达盒，其特征在于，所述目的基因位于所述u6启动子下游。

4.一种用于表达目的基因的表达质粒，其特征在于，包括权利要求2或3所述的基因表达盒。

5.权利要求1所述的u6启动子、权利要求2或3所述的基因表达盒或者权利要求4所述的表达质粒在对细胞进行遗传操作中的...

【专利技术属性】
技术研发人员：柯飞，康漪，张奇亚，
申请(专利权)人：中国科学院水生生物研究所，
类型：发明
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