一种猪轮状病毒反向遗传系统及其应用技术方案

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及一种轮状病毒反向遗传系统的构建及其在拯救NMTL猪轮状病毒株中的应用。本发明专利技术发现针对不同基因型的轮状病毒的拯救工作，其利用的反向遗传操作系统会有显著不同。针对本发明专利技术的G9P[23]基因型猪轮状病毒株，将猪轮状病毒的11基因片段重组到pOK‑T7载体上获得10个猪轮状病毒感染性重组质粒，其中，本发明专利技术将编码病毒NSP2和NSP5的基因放到一个质粒中，得到pOK‑T7‑NSP2/5质粒，最终形成基于10个猪轮状病毒感染性重组质粒的反向遗传系统。应用该系统能够成功拯救了G9P[23]基因型猪轮状病毒NMTL株，得到rNMTL猪轮状重组病毒株。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药，具体涉及一种轮状病毒反向遗传系统的构建及其在拯救nmtl猪轮状病毒株中的应用。

技术介绍

1、猪轮状病毒是呼肠孤病毒科（reoviridae）轮状病毒属（rotavirus）的成员，是一种无包膜、分节段的双链rna病毒。猪轮状病毒粒子呈20面体对称，基因组含有11个节段，分别编码6个结构蛋白（vp1、vp2、vp3、vp4、vp6、vp7）和6个非结构蛋白（nsp1、nsp2、nsp3、nsp4、nsp5、nsp6）。

2、根据病毒衣壳蛋白vp6的抗原性，分为11个群（group a -e, g-l），其中a、b、c群是猪中最常见的致病型，尤其是a群在全世界范围内流行，流行率3.3%~67.3%，而规模化养殖场感染率高达61%~74%（presence and characterization of pig group a and crotaviruses in feces of belgian diarrheic suckling piglets[j]. virus res.2016;213:172-183.）。研究显本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种猪轮状病毒重组毒株，所述猪轮状病毒重组毒株是通过如下方法获得的，具体包括如下步骤：

2.如权利要求1所述猪轮状病毒重组毒株，所述猪轮状病毒为G9P[23]基因型，所述宿主细胞为BHK细胞。

3.如权利要求1所述猪轮状病毒重组毒株，所述pOK-T7-NSP2/5重组质粒中的NSP2与NSP5基因通过Linker连接，所述Linker选自柔性连接肽、刚性连接肽和体内可裂解连接肽。

4.如权利要求1所述猪轮状病毒重组毒株，所述重组质粒为携带猪轮状病毒基因片段的感染性重组质粒或携带猪轮状病毒基因片段和报告基因的感染性重组质粒。>

5.如权利要...

【技术特征摘要】

1.一种猪轮状病毒重组毒株，所述猪轮状病毒重组毒株是通过如下方法获得的，具体包括如下步骤：

2.如权利要求1所述猪轮状病毒重组毒株，所述猪轮状病毒为g9p[23]基因型，所述宿主细胞为bhk细胞。

3.如权利要求1所述猪轮状病毒重组毒株，所述pok-t7-nsp2/5重组质粒中的nsp2与nsp5基因通过linker连接，所述linker选自柔性连接肽、刚性连接肽和体内可裂解连接肽。

4.如权利要求1所述猪轮状病毒重组毒株，所述重组质粒为携带猪轮状病毒基因片段的感染性重组质粒或携带猪轮状病毒基因片段和报告基因的感染性重组质粒。

5.如...

【专利技术属性】
技术研发人员：田进，冯力，潘玉迪，
申请(专利权)人：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心，
类型：发明
国别省市：