提高α-葡聚糖磷酸化酶催化活性的方法及突变体TpαGPM7、基因和应用技术

本发明专利技术涉及酶工程领域，具体涉及提高α‑葡聚糖磷酸化酶催化活性的方法及突变体TpαGPM7、基因和应用。针对现有α‑葡聚糖磷酸化酶难以同时满足高温操作所必需的优异热稳定性和高效催化所需的高比活性，本发明专利技术通过定点突变技术，对Thermotoga petrophila来源的α‑葡聚糖磷酸化酶进行改造，获得催化活性提升的単点突变体TpαGPM7。本发明专利技术的α‑葡聚糖磷酸化酶突变体可广泛应用于人工合成淀粉等多糖生产中。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程领域，具体涉及提高α-葡聚糖磷酸化酶催化活性的方法及突变体 tpαgpm7、基因和应用。

技术介绍

1、传统的植物源淀粉生产高度依赖光合碳固定途径，受限于光能转化效率低及代谢调控复杂性，难以突破产能瓶颈。近年来，合成生物学技术在利用秸秆合成淀粉取得突破性进展，α-葡聚糖磷酸化酶(alpha-glucan phosphorylase，αgp)是其中的关键酶元件。

2、α-葡聚糖磷酸化酶αgp是广泛存在于植物、动物及微生物中一种关键糖基转移酶(归类于糖基转移酶第35家族)。该酶催化α-1,4-葡聚糖链的可逆磷酸解反应：正向反应，在引物(短链α-1,4-葡聚糖)存在下，利用g-1-p通过葡萄糖基转移反应合成延伸α-1,4-葡聚糖链；逆向反应，糖基从葡聚糖链的非还原端磷酸解离生成葡萄糖-1-磷酸(glucose-1-phosphate，g-1-p)。值得注意的是，这一催化过程无需额外能量输入，为工业生产提供了一种经济的多糖合成方式。

3、在人工淀粉合成等工业生物转化过程本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种在高温下催化活性提高的α-葡聚糖磷酸化酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4所示。

2.一种α-葡聚糖磷酸化酶基因，其特征在于，所述基因编码氨基酸序列如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4所示的α-葡聚糖磷酸化酶。

3.包括权利要求2所述的α-葡聚糖磷酸化酶基因的重组载体。

4.包括权利要求2所述的α-葡聚糖磷酸化酶基因的重组菌株。

5.一种提高α-葡聚糖磷酸化酶在高温下的催化活性的方法，其特征在于，所述方法包括对SEQ ID NO:1所示的α-葡聚糖磷酸化酶进行以下突...

【技术特征摘要】

1.一种在高温下催化活性提高的α-葡聚糖磷酸化酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如seq id no:2或seq id no:4所示。

2.一种α-葡聚糖磷酸化酶基因，其特征在于，所述基因编码氨基酸序列如seq id no:2或seq id no:4所示的α-葡聚糖磷酸化酶。

3.包括权利要求2所述的α-葡聚糖磷酸化酶基因的重组载体。

4.包括权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：涂涛，沈怡雯，罗会颖，姚斌，王亚茹，田健，秦星，王晓璐，张红莲，刘絮，张杰，苏小运，黄火清，柏映国，王苑，于会民，
申请(专利权)人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：