一株猪博卡病毒细胞适应株的分离、鉴定及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株猪博卡病毒细胞适应株的分离、鉴定及其应用，属于基因工程技术领域。其保藏编号为CGMCC No.46413，能够在猪肾细胞(PK)传代细胞中稳定增殖并诱导显著细胞病变效应。本发明专利技术通过宏基因组测序、透射电镜观察及间接免疫荧光技术完成病毒分离与鉴定，并基于VP1基因序列构建系统进化树。本发明专利技术还建立了仔猪感染模型，证实猪博卡病毒细胞适应株CNH‑2024可引发急性腹泻及肺部病理损伤。本发明专利技术还提供了特异性荧光定量PCR引物组合、疫苗制备方法及诊断试剂盒。本发明专利技术提供的分离鉴定得到的猪博卡病毒细胞适应株CNH‑2024为猪博卡病毒致病机制研究、疫苗开发及临床诊断提供了重要技术基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程，特别是涉及一株猪博卡病毒细胞适应株的分离、鉴定及其应用。

技术介绍

1、博卡病毒可感染人类、牛、犬、大猩猩、猫、海狮等物种。猪博卡病毒(porcinebocavirus，pbov)pbov属于细小病毒亚科博卡细小病毒属的单链dna病毒，与呼吸道及肠道感染密切相关。其基因组包含三个开放阅读框(orf1-3)：orf1编码非结构蛋白ns1；orf2编码衣壳蛋白vp1/vp2(vp1为vp2的全长序列融合n端延伸)；orf3编码核磷蛋白np1，可抑制i型干扰素产生。基于vp1序列的系统发育分析显示，pbov可分为三大基因型：g2和g3分别形成独立分支。

2、pbov作为博卡细小病毒属新成员，常见于腹泻或呼吸道感染猪群。尽管pbov感染广泛流行，但其致病本质与生物学特征仍不明确，这主要归因于其缺乏体外培养体系。由于缺乏稳定的细胞培养体系，pbov的生物学特性与致病机制研究长期受阻。研究表明，pbov无法在猪肺泡巨噬细胞、hek293t、marc145、st及pk15等细胞系中增殖，且实验动物模型的缺失使得pbov的致病属性(呼吸本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一株猪博卡病毒细胞适应株CNH-2024，其特征在于，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.46413。

2.根据权利要求1所述的猪博卡病毒细胞适应株CNH-2024，其特征在于，所述猪博卡病毒细胞适应株CNH-2024的VP1基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.一种猪博卡病毒感染仔猪模型的构建方法，其特征在于，包括对健康仔猪接种权利要求1或2所述猪博卡病毒细胞适应株CNH-2024的步骤。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述健康仔猪的PBoV抗原、抗体及肠道病原体PEDV、T...

【技术特征摘要】

1.一株猪博卡病毒细胞适应株cnh-2024，其特征在于，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.46413。

2.根据权利要求1所述的猪博卡病毒细胞适应株cnh-2024，其特征在于，所述猪博卡病毒细胞适应株cnh-2024的vp1基因核苷酸序列如seq id no.1所示。

3.一种猪博卡病毒感染仔猪模型的构建方法，其特征在于，包括对健康仔猪接种权利要求1或2所述猪博卡病毒细胞适应株cnh-2024的步骤。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述健康仔猪的pbov抗原、抗体及肠道病原体pedv、tgev和porv检测均为阴性。

5.一种检测权利要求1或2所述猪博卡病毒细胞适应株cnh-2024的荧光定量pcr引物组合，其特征在于，包括如seq ...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯力，季朝阳，时洪艳，张鑫，石达，符芳，
申请(专利权)人：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心，
类型：发明
国别省市：