一种核酸等温扩增检测体系及其检测方法技术

技术编号:46006924 阅读:16 留言:0更新日期:2025-08-01 19:11
本发明专利技术提供了一种核酸等温扩增检测体系及其检测方法,通过组合使用切口内切酶、DNA聚合酶(对于RNA模板增加逆转录酶)以及核糖核酸内切酶,设计含有切口内切酶的切割识别序列的引物,和含有至少一个核糖核苷酸碱基的探针,并对引物和探针进行碱基修饰,从而实现等温扩增过程中,测靶核酸的信号强度被不断放大,显著检测灵敏度,同时还能避免错配以降低非特性扩增,提高检测特异性,防止漏检、错检,并且能缩短检测时间,拓宽适用范围。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因检测领域,具体涉及一种核酸等温扩增检测体系及其检测方法


技术介绍

1、核酸检测已广泛地应用于传染病或遗传病诊断、流行病学调查、肿瘤突变基因检测等领域,与免疫学检测技术相比,分子诊断灵敏度更高,结果更准确、可靠。核酸检测的最关键步骤为核酸扩增技术,聚合酶链式反应(pcr)是一种经典成熟的体外核酸扩增方法。然而,大型精密仪器及复杂的操作步骤,使得其应用场景依然受限。近些年来恒温体外核酸扩增技术悄然兴起,如lamp(环介导等温扩增技术)、tma(转录介导的扩增方法)、rpa(重组酶聚合酶扩增)、sda(链置换扩增技术)、hda(解旋酶依赖型扩增技术)、nasba(依赖核酸序列的扩增技术)、rca(滚环复制核酸扩增技术)、near(切口酶扩增反应技术)等。

2、其中的near(切口酶扩增反应技术)具有就是在dna切面上形成小切口,然后让聚合酶找到那个地方开始复制,不断的形成切口,不断的复制。这是非常巧妙的方法,不需要做pcr反应和热循环,让核酸扩增过程变得非常简单,而且速度更快。

3、随着单链缺口限制性内切酶(又称切口酶本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种核酸等温扩增检测体系,其特征在于,包括引物、探针、切口内切酶和核糖核酸内切酶;所述引物中含有切口内切酶的切割识别序列;所述探针中含有至少一个核糖核苷酸碱基,所述核糖核苷酸碱基能与靶标序列互补。

2.如权利要求1所述的核酸等温扩增检测体系,其特征在于,还包括DNA聚合酶或逆转录酶;当靶标序列为DNA序列时,包括DNA聚合酶,当靶标序列为RNA序列时,除了DNA聚合酶还包括逆转录酶。

3.如权利要求2所述的核酸等温扩增检测体系,其特征在于,所述切口内切酶包括Nt.

4.如权利要求3所述的核酸等温扩增检测体系,其特征在于,所述核糖核酸内切酶为RNas...

【技术特征摘要】

1.一种核酸等温扩增检测体系,其特征在于,包括引物、探针、切口内切酶和核糖核酸内切酶;所述引物中含有切口内切酶的切割识别序列;所述探针中含有至少一个核糖核苷酸碱基,所述核糖核苷酸碱基能与靶标序列互补。

2.如权利要求1所述的核酸等温扩增检测体系,其特征在于,还包括dna聚合酶或逆转录酶;当靶标序列为dna序列时,包括dna聚合酶,当靶标序列为rna序列时,除了dna聚合酶还包括逆转录酶。

3.如权利要求2所述的核酸等温扩增检测体系,其特征在于,所述切口内切酶包括nt.

4.如权利要求3所述的核酸等温扩增检测体系,其特征在于,所述核糖核酸内切酶为rnaseh2。

5.如权利要求4所述的核酸等温扩增检测体系,其特征在于,所述引物从5’端至3’端依次包含稳定区域序列、切口酶识别序列、靶核酸识别区域;所述探针为taqman探针、mgb探针、分子信标探针中的任意一种;探针上的标记物为荧光素、生物素、地高辛、同位素中的任意一种。

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【专利技术属性】
技术研发人员:陈文柱王剑峰于继彬
申请(专利权)人:苏州先达基因科技有限公司
类型:发明
国别省市:

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