一种PEG介导的菌核青霉菌株原生质体的遗传转化方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种PEG介导的菌核青霉菌株原生质体的遗传转化方法及其应用。该方法包括如下步骤：(1)先将将菌核青霉培养产孢，然后进行菌丝的萌发，再收集、清洗新鲜菌核青霉菌丝；(2)将Lysing Enzymes、Yatalase、纤维素酶和果胶酶复合，配制原生质体酶解液，再加入到菌核青霉菌丝中进行酶解，得到菌核青霉原生质体；(3)将待转化质粒加入到菌核青霉原生质体中，经PEG介导转化和抗性筛选，得到菌核青霉原生质体转化子。本发明专利技术方法能够显著提高原生质体数量和再生率，且能够有效缩短酶解时间。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，特别涉及一种peg介导的菌核青霉菌株原生质体的遗传转化方法及其应用。

技术介绍

1、植物内生真菌分布广泛、种类众多，具有显著的生物多样性，是丰富的生物活性天然产物资源，同时也是植物化学成分的新型来源和重要的微生物资源。大量研究表明药用植物内生菌具有很强的生物活性，可以产生大量具有农业、工业和现代医学潜在用途的物质，如新型抗生素、抗真菌药、免疫抑制剂和抗癌化合物，在医药和农业领域具有巨大的开发潜力。

2、菌核青霉是分离自中药植物马齿苋根茎中的植物内生真菌，其在农业病虫害防治领域显示出了极强的生物活性，如能有效防治茄科作物青枯病、稻瘟病以及寄生性线虫等，具有成为新型生防菌的潜力。由于菌核青霉作用机理方面研究基础较薄弱，缺乏有效的遗传转化体系是限制其深入研究的重要原因。因此，建立一种高效、简单、稳定的遗传转化体系及方法对菌核青霉菌株可视化动态监测及机理探究具有重要意义。

技术实现思路

1、本专利技术的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种peg介导的菌核青霉菌株原生质体的遗传转化本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种PEG介导的菌核青霉菌株原生质体的遗传转化方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤(2)之后，步骤(3)之前还包括菌核青霉原生质体再生的步骤；具体为：将步骤(2)中得到的菌核青霉原生质体用STC溶液稀释后，涂布到Bottom Agar培养基上，置于28±1℃恒温培养箱培养2～3天。>

7.根据权利...

【技术特征摘要】

1.一种peg介导的菌核青霉菌株原生质体的遗传转化方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤(2)之后，步骤(3)之前还包括菌核青霉原生质体再生的步骤；具体...

【专利技术属性】
技术研发人员：颜健，杨淇淋，宋嘉仪，黎平，管子骏，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：