一种基于SEC-HPLC定量检测腺病毒VP数的方法技术

本发明专利技术涉及生物检测技术领域，具体涉及一种基于SEC‑HPLC定量检测腺病毒VP数的方法。本发明专利技术提供的SEC‑HPLC(尺寸排阻高效液相色谱)法检测腺病毒VP数的方法包括：采用SEC‑HPLC法定量检测腺病毒VP数：所述SEC‑HPLC法采用的色谱柱是TSK‑gel凝胶色谱柱，流动相为Tris‑HCl NaCl溶液；所述方法可用于定量检测病毒收获液及原液中腺病毒VP数。本申请提供的SEC‑HPLC法检测腺病毒VP数的方法，具有操作简单、重复性好、精密度高的特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及病毒检测领域，尤其涉及一种基于sec-hplc定量检测腺病毒vp数的方法。

技术介绍

1、腺病毒(adenovirus，adv)是一种双链dna非包膜病毒，直径为70-90nm的病毒颗粒，由252个壳粒呈正二十面体排列而成。

2、传统病毒疫苗主要是灭活疫苗或减毒疫苗，其安全性和有效性可以进一步改善和发展。随着基因工程的发展，利用改造的病毒载体来表达和诱导具有免疫保护作用的抗原基因已成为疫苗研制的一种重要途径和手段。

3、腺病毒载体的优势包括宿主范围广，可感染分裂期及非分裂期细胞。病毒基因组相对稳定，易于产生高滴度病毒。便于插入较大的外源dna片段，同时可以减少插入基因的突变。涉及相对简单，便于快速制造，经济成本较低。对人体相对安全且具体较高的免疫原性。

4、最初腺病毒载体主要应用于基因治疗，特别是肿瘤治疗。由于腺病毒自身抗原诱导较强的先天性和适应性免疫应答，使得通过腺病毒载体进行的人体基因转移，包括替换缺失或缺陷基因的效果不佳。但腺病毒载体自身的这种优势使其成为表达外源基因并诱导较强的先天性和适应性免疫应答本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于SEC-HPLC定量检测腺病毒VP数的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：所述腺病毒供试品经过核酸酶预处理后采用SEC-HPLC分离测定，记录色谱图，并得出线性方程，采用线性方程计算供试品溶液中腺病毒VP数；

2.根据权利要求1所述的基于SEC-HPLC定量检测腺病毒VP数的方法，其特征在于，所述腺病毒供试品采用核酸酶进行处理，核酸酶浓度为10-100U/mL，处理时间为0-4小时，结束后核酸酶采用终浓度为15-25mM Tris、5-15mM EDTA pH6.8-8.0溶液进行终止反应，然后采用滤膜进行过滤后上样。

3.根据权利要求1所述的基于...

【技术特征摘要】

1.一种基于sec-hplc定量检测腺病毒vp数的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：所述腺病毒供试品经过核酸酶预处理后采用sec-hplc分离测定，记录色谱图，并得出线性方程，采用线性方程计算供试品溶液中腺病毒vp数；

2.根据权利要求1所述的基于sec-hplc定量检测腺病毒vp数的方法，其特征在于，所述腺病毒供试品采用核酸酶进行处理，核酸酶浓度为10-100u/ml，处理时间为0-4小时，结束后核酸酶采用终浓度为15-25mm tris、5-15mm edta ph6.8-8.0溶液进行终止反应，然后采用滤膜进行过滤后上样。

3.根据权利要求1所述的基于sec-hplc定量检测腺病毒vp数的方法，其特征在于，所述腺病毒供试品中病毒颗粒数不低于3.5x108 vp/ml。

4.根据权利要求1所述的基于sec-hplc定量检测腺病毒vp数的方法，其特征在于，所述a相tris-hcl溶液的浓度为0.01-0.05mol/l；b相tris-hcl nacl中tris-hcl的浓度为0.01-0.05mol/l，nacl的浓度为0.5-1.5mol/l。

5.根据权利要求1所述的基于sec-hp...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘彬，张宝蓉，李艳娇，仝鑫，范荣坤，陈敏，刘票，
申请(专利权)人：云南疫苗实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：