生产S-腺苷甲硫氨酸的酿酒酵母工程菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了生产腺苷蛋氨酸的酿酒酵母工程菌及其应用，属于生物化学领域。以酿酒酵母为底盘细胞，通过过表达胱硫醚‑γ‑合酶基因(Cystathionineγ‑syn thase，STR2)以及敲除酿酒酵母菌中S‑腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因(S‑adenosylmeth ionine decarboxylase，SPE2)，以阻断SAM经该脱羧酶反应产生S‑腺苷‑3‑甲硫基丙胺的代谢路径，去除该杂质并提高SAM纯度及产量，以构建产SAM酿酒酵母工程菌，并对其进行培养基及产品提取优化，包括一级种子培养基、二级种子培养基、发酵培养基、发酵补料培养基，进一步提高了其SAM生产水平，并通过精致和提取，最终SAM产量达到102.1g/L，具有明显的工业应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物化学，特别涉及一种利用改造后酿酒酵母发酵生产s-腺苷甲硫氨酸的培养基及发酵方法。

技术介绍

1、丁二磺酸腺苷蛋氨酸是腺苷蛋氨酸1,4-丁二磺酸盐，腺苷蛋氨酸，又称腺苷甲硫氨酸，常用缩略语为sam、same或adomet，是甲硫氨酸活性形式。1951年cantoni发现广泛存在于动物、植物(mathur et al.1992)和微生物体内，也是人体内一种重要的生理活性物质，参与了40多种生化反应，可作为底物参与合成半胱氨酸、牛磺酸、谷胱甘肽、辅酶a等重要物质，并作为基团供体或酶诱导剂在人体组织三大代谢过程中起到转甲基、转硫基和甲酰化作用。因此，sam对人体许多疾病的预防和治疗，都有积极作用。药用sam是由德国基诺药厂首先生产(商品名：思美泰)并应用于临床，目前在意大利、西班牙、俄罗斯、法国、美国等国作为肝病、胰腺炎和抗抑郁药等应用于临床。

2、丁二磺酸腺苷蛋氨酸已在ep7版欧洲药典中收载，命名为丁二磺酸腺苷蛋氨酸，其化学名称为：(±)-5'-[(r)-3-氨基-3-羧丙基]甲磺基]-5'-脱氧腺苷1,4-丁烷二磺酸盐。英文名为a本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.生产腺苷蛋氨酸的酿酒酵母工程菌，其特征在于：该酿酒酵母工程菌为过表达胱硫醚-γ-合酶基因str2并敲除S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因SPE2。

2.根据权利要求1所述酿酒酵母工程菌，其特征在于：所述胱硫醚-γ-合酶基因str2和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因SPE2来源于酿酒酵母。

3.如权利要求1或2所述酿酒酵母工程菌在生物转化合成S-腺苷甲硫氨酸中的应用。

4.根据权利要求3所述生物转化合成S-腺苷甲硫氨酸中的应用，其特征在于：将含有酿酒酵母工程菌的菌体加入发酵罐，进行补料分批高密度发酵培养，加入IPTG及蛋氨酸进行诱导培养得到发酵清液，接着提取和精制...

【技术特征摘要】

1.生产腺苷蛋氨酸的酿酒酵母工程菌，其特征在于：该酿酒酵母工程菌为过表达胱硫醚-γ-合酶基因str2并敲除s-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因spe2。

2.根据权利要求1所述酿酒酵母工程菌，其特征在于：所述胱硫醚-γ-合酶基因str2和s-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因spe2来源于酿酒酵母。

3.如权利要求1或2所述酿酒酵母工程菌在生物转化合成s-腺苷甲硫氨酸中的应用。

4.根据权利要求3所述生物转化合成s-腺苷甲硫氨酸中的应用，其特征在于：将含有酿酒酵母工程菌的菌体加入发酵罐，进行补料分批高密度发酵培养，加入iptg及蛋氨酸进行诱导培养得到发酵清液，接着提取和精制得到s-腺苷甲硫氨酸。

5.根据权利要求4所述生物转化合成s-腺苷甲硫氨酸中的应用，其特征在于：将酿酒酵母工程菌种接种活化培养基，依次经过一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基后得到将含有酿酒酵母工程菌的菌体。

6.根据权利要求5所述利用酿酒酵母发酵生产s-腺苷甲硫氨酸的培养基，其特征在于：菌种活化培养基组成为：葡萄糖10g、蛋白胨10g、酵母膏5g，加入到1000ml瓶中，加纯化水搅拌均匀，采用氢氧化钠水溶液调ph＝5.0。

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【专利技术属性】
技术研发人员：杨邵华，张辉，王德地，何滨，陈娅，赵森，刘宜师，祁峰，
申请(专利权)人：拓新药业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：