一种用于生产人源化抗体的经遗传修饰的非人哺乳动物的制备方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种用于生产人源化抗体的经遗传修饰的非人哺乳动物的制备方法及应用。所述制备方法包括：(1)对非人哺乳动物进行内源重链免疫球蛋白基因座的破坏；(2)向步骤(1)所得非人哺乳动物中导入人源IGHV基因、人源IGHD基因、人源IGHJ基因和非人哺乳动物的内源IgHG基因、IgHE基因、IgHA基因和LCR区。根据本发明专利技术的制备方法所制备的非人哺乳动物经抗原免疫后能够高效地产生人源化全抗体或单重链抗体或纳米抗体，具有较高的免疫效价，并且，本发明专利技术的制备方法能以较高的效率获得阳性动物，从而可以很容易制备不同抗体多样性的人源化小鼠，用多种品系小鼠实现纳米抗体序列多样性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及一种用于生产人源化抗体的经遗传修饰的非人哺乳动物的制备方法及应用。

技术介绍

1、在骆驼科动物和鲨鱼的体内会产生一种结构独特的抗体——单重链抗体(heavy-chain-only)，这种抗体只由重链构成，其可变区片段分子量(15kda)约为传统抗体(150-160kda)的十分之一。单重链抗体的可变区片段也被称为纳米抗体(nanobody)。纳米抗体在双特异性/多特异抗体开发、car-t细胞疗法等已获得了广泛应用，截至2023年1月，已经有4款基于纳米抗体的治疗药物上市，其中传奇生物开发的基于纳米抗体的bcmacar-t疗法获得了优秀的临床效果。此外，作为中和抗体开发的纳米抗体已有超过10个分子进入临床ii/iii期。纳米抗体的药物研发和应用依然处在比较早期的阶段，具有巨大的应用潜力和发展前景。

2、全人纳米抗体小鼠是用于纳米抗体药物开发的全人纳米抗体小鼠，基于自主研发的百kb至兆b(mega base pair,简称兆b)级别基因组片段人源化技术，实现了抗体重链基因的人源化，涵盖了人类主要重链可变区基因。使用hun本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种经遗传修饰的非人哺乳动物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述非人哺乳动物为小鼠，并且步骤(1)中，所述内源重链免疫球蛋白基因座的破坏包括以下基因片段的缺失：

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，通过CRISPR-Cas9基因编辑技术，使得所述基因片段缺失；

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述非人哺乳动物为小鼠，并且步骤(1)中，所述内源重链免疫球蛋白基因座的破坏包括以下基因片段的缺失：

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，通过CRI...

【技术特征摘要】

1.一种经遗传修饰的非人哺乳动物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述非人哺乳动物为小鼠，并且步骤(1)中，所述内源重链免疫球蛋白基因座的破坏包括以下基因片段的缺失：

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，通过crispr-cas9基因编辑技术，使得所述基因片段缺失；

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述非人哺乳动物为小鼠，并且步骤(1)中，所述内源重链免疫球蛋白基因座的破坏包括以下基因片段的缺失：

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，通过crispr-cas9基因编辑技术，使得所述基因片段缺失；

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，通过以下方式导入所述人源ighv基因、人源ighd基因、人源ighj基因和非人哺乳动物的内源ighg基因、ighe基因、igha基因和lcr区：

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：王皓毅，杜小明，金鹏鹏，高晖，朱萍霞，
申请(专利权)人：北京仁源欣生生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：