一种用于家蚕传染性软化病病毒荧光定量PCR检测的引物探针组合、试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种用于家蚕传染性软化病病毒荧光定量PCR检测的引物探针组合、试剂盒及其应用，属于分子生物学检测技术领域。本发明专利技术提供了一种用于家蚕传染性软化病病毒(BmIFV)荧光定量PCR检测的引物探针组合，包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的上游引物、核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的下游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的探针；所述探针的5'端标记有荧光基团，3'端标记有淬灭基团。本发明专利技术的引物探针组合特异性强、灵敏度高，仅能扩增BmIFV，不能扩增家蚕其他病原，检测限达48copies/μL。本发明专利技术的引物探针组合能够用于家蚕养殖过程中BmIFV的早期检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学检测，尤其涉及一种用于家蚕传染性软化病病毒荧光定量pcr检测的引物探针组合、试剂盒及其应用。

技术介绍

1、家蚕传染性软化病是一种严重影响蚕业生产的流行性病毒病，其病原体为家蚕传染性软化病病毒(bombyx moriinfectious flacherie virus，bmifv)。显微镜观察已被广泛用于家蚕病原微生物的检测，但由于bmifv是非包涵体病毒，在普通光学显微镜下无法观察到病毒粒子。在蚕业生产实践中，对该病毒的检测主要依赖于经验性的病症判别。但问题在于，bmifv所引发的病症与家蚕浓核病及细菌病的症状极为相似，这使得仅凭病症判断很难实现准确且早期的确诊，进而容易导致群体感染的发生。血清学鉴别法具有特异性强、灵敏度高的特点，但是存在比较高的交叉反应与非特异性反应。随着分子生物技术的发展，传染性软化病病毒可通过在保守区域设计特异性引物，将病毒rna反转录成cdna后，进行pcr检测。实时荧光pcr(real-time pcr)是在pcr反应体系中加入荧光探针或荧光染料，利用荧光信号积累实时监测整个pcr进程，最后通过扩增曲线本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于家蚕传染性软化病病毒荧光定量PCR检测的引物探针组合，其特征在于，包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的上游引物、核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的下游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的探针；所述探针的5'端标记有荧光基团，3'端标记有淬灭基团。

2.一种用于家蚕传染性软化病病毒荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的荧光探针组合。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包括荧光定量PCR的反应液。

4.权利要求1所述的引物探针组合或者权利要求2或3所述的试剂盒在非诊断目的的家蚕传染性软化...

【技术特征摘要】

1.一种用于家蚕传染性软化病病毒荧光定量pcr检测的引物探针组合，其特征在于，包括核苷酸序列如seq id no.1所示的上游引物、核苷酸序列如seq id no.2所示的下游引物和核苷酸序列如seq id no.3所示的探针；所述探针的5'端标记有荧光基团，3'端标记有淬灭基团。

2.一种用于家蚕传染性软化病病毒荧光定量pcr检测的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的荧光探针组合。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包括荧光定量pcr的反应液。

4.权利要求1所述的引物探针组合或者权利要求2或3所述的试剂盒在非诊断目的的家蚕传染性软化病病毒荧光定量pcr检测中的应用。

5.一种非诊断目的的家蚕传染性软化病病毒荧光定量pcr检测的方法，其特征在于，包括以下步骤：

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述荧光定量pcr的反应体系以10μl计，包括以下组分：探针0.1μl、上游引物0.2μl、...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟宪志，解芳丽，何章帅，潘国庆，陈洁，周泽扬，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：