【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
技术实现思路
1、faslg是一种与tnfrsf6/fas结合的细胞因子，所述tnfrsf6/fas是一种将凋亡信号转导入细胞的受体。公开了敲除细胞中faslg基因以用于免疫疗法方法(如car-t治疗)的方法。经修饰具有faslg敲除的细胞改善所述细胞在同种异体过继转移疗法中的性能。此类细胞具有改善的活性、保留和/或扩增特性以用于过继性癌症免疫疗法。
2、本公开还提供了用于使细胞中fas配体(faslg)基因的等位基因失活的方法，所述方法包括
3、向所述细胞引入组合物，所述组合物包含：
4、crispr核酸酶或编码该crispr核酸酶的多核苷酸分子；和
5、rna分子，其包含具有17-50个核苷酸的向导序列部分或编码该rna分子的多核苷酸分子，
6、其中所述crispr核酸酶和所述rna分子的复合物影响所述faslg基因的等位基因中的双链断裂。
7、在一些实施方案中，所述rna分子包含向导序列部分，所述向导序列部分靶向...
【技术保护点】
1.一种用于使细胞中Fas配体(FASLG)基因的等位基因失活的方法，所述方法包括向所述细胞引入组合物，所述组合物包含：
2.根据权利要求1的方法，其中将所述组合物引入受试者的细胞或培养的细胞。
3.根据权利要求1-2中任一项的方法，其中所述细胞是淋巴细胞、T细胞、T调节细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、干细胞或成纤维细胞、血细胞、肝细胞、角质形成细胞或能够重编程为诱导多能干细胞(iPSC)的任何其他细胞类型。
4.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述细胞是造血干细胞(HSC)、诱导多能干细胞(iPS细胞)、i...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于使细胞中fas配体(faslg)基因的等位基因失活的方法，所述方法包括向所述细胞引入组合物，所述组合物包含：
2.根据权利要求1的方法，其中将所述组合物引入受试者的细胞或培养的细胞。
3.根据权利要求1-2中任一项的方法，其中所述细胞是淋巴细胞、t细胞、t调节细胞、b细胞、自然杀伤(nk)细胞、巨噬细胞、干细胞或成纤维细胞、血细胞、肝细胞、角质形成细胞或能够重编程为诱导多能干细胞(ipsc)的任何其他细胞类型。
4.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述细胞是造血干细胞(hsc)、诱导多能干细胞(ips细胞)、ipsc衍生的细胞、自然杀伤细胞(nk)、ips衍生的nk细胞(ink)、t细胞、先天样t细胞(it)、天然杀伤t细胞(nkt)、γδt细胞、ipsc衍生的t细胞、恒定nkt细胞(inkt)、ipsc衍生的nkt、单核细胞或巨噬细胞。
5.根据权利要求1-4中任一项的方法，其中所述crispr核酸酶和所述rna分子是在基本上相同的时间或在不同的时间引入细胞的。
6.根据权利要求1-5中任一项的方法，其中所述细胞中的faslg基因的等位基因进行插入或缺失突变。
7.根据权利要求6的方法，其中所述插入或缺失突变产生早期终止密码子。
8.根据权利要求1-7中任一项的方法，其中所述失活导致由突变的等位基因编码的截短的蛋白质。
9.根据权利要求1-8中任一项的方法，其中所述引入细胞的组合物还包含含有向导序列部分的第二rna分子，其中所述第二rna分子的向导序列部分包含17-50个连续核苷酸，所述17-50个连续核苷酸含有seq id no:1-11121中任一项所示序列中的核苷酸，优选其中所述第二rna分子的向导序列部分不同于所述第一rna分子的向导序列部分。
10.一种用于使细胞中fas配体(faslg)基因的等位基因失活的方法，所述方法包括向所述细胞引入组合物，所述组合物包含：
11.根据权利要求10的方法，其中所述rna分子的向导序列部分包含相对于所述向导序列部分的完全互补靶序列的1、2、3、4或5个核苷酸错配。
12.根据权利要求10或11中任一项的方法，其中相对于与faslg基因的等位基因具有更高互补性的向导序列部分，所述向导序列部分提供对crispr核酸酶和rna分子的复合物的更高的靶向特异性。
13.根据权利要求10-12中任一项的方法，其中所述引入细胞的组合物还包含含有向导序列部分的第二rna分子，其中所述rna分子的向导序列部分包含17-50个连续核苷酸，所述17-50个连续核苷酸含有seq id no:1-11121中任一项所示序列中的核苷酸，或seq id no:1-11121中的任一项，其被修饰以含有相对于所述向导序列部分的完全互补靶序列的1、2、3、4或5个核苷酸错配，优选其中所述第二rna分子的向导序列部分不同于所述第一rna分子的向导序列部分。
14.一种包含rna分子的组合物，所述rna分子包含含有17-50个连续核苷酸的向导序列部分，所17-50个述连续核苷酸含有seq id no:1-11121中任一项所示的序列中的核苷酸。
15.根据权利要求14的组合物，其还包含含有向导序列部分的第二rna分子，其中向导序列部分包含17-50个连续核苷酸，所述17-50个连续核苷酸含有seqid no:1-11121中任一项所示序列中的核苷酸，优选其中所述第二rna分子的向导序列部分不同于所述第一rna分子的向导序列部分。
16.一种包含rna分子的组合物，所述rna分子包含含有17-50个连续核苷酸的向导序列部分，所述17-50个连续核苷酸含有seq id no:1-11121中任一项所示序列中的核苷酸；或seq id no:1-11121中的任一项，其被修饰以含有相对于所述向导序列部分的完全互补靶序列的1、2、3、4或5个核苷酸错配。
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