一种豹纹鳃棘鲈红色素细胞的分离和培养方法技术

本发明专利技术涉及细胞分离培养技术领域，特别是涉及一种豹纹鳃棘鲈红色素细胞的分离和培养方法。本发明专利技术首次创建了一种豹纹鳃棘鲈红色素细胞的分离方法，本发明专利技术使用EDTA消化液预消化豹纹鳃棘鲈鱼鳍外层的表皮细胞，再用胶原酶消化液消化内部真皮的结缔组织（色素细胞），而不使用胰蛋白酶等对细胞损伤大的消化酶和其他机械方法，能够减小细胞损伤，可以有效地分离得到高纯度、活性良好且可以进行体外培养的豹纹鳃棘鲈红色素细胞，为后续的单细胞测序、细胞体外培养以及分子功能验证等实验奠定基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞分离培养，特别是涉及一种豹纹鳃棘鲈红色素细胞的分离和培养方法。

技术介绍

1、由于鱼类体表不同的色素细胞的种类、分布和色素颗粒排列的不同会使鱼类的体色十分多样化。因此，能够分离得到单一的色素细胞，对动物的体色形成的生物学机制的研究有重要意义，有利于探究鱼类体色形成背后的分子机制，为分子育种奠定基础。鱼类的色素细胞主要包括黑色素细胞，黄色素细胞，红色素细胞，虹彩细胞和蓝色素细胞等。1982年eisinger等研究人员首次成功在体外分离了人的黑色素细胞，此后多种哺乳动物的色素细胞被成功分离和体外培养。目前已经有多种鱼类的色素细胞被成功分离，主要是黑色素细胞和黄色素细胞。1987年，clark等用含有胶原酶iii和肾上腺素的消化液，成功分离了金鱼的黑色素细胞；2004年，sato等利用胶原酶ii消化尾鳍组织，成功分离了尼罗罗非鱼的红色素细胞；2019年，han等用胶原酶溶液消化鳞片，成功在体外分离了大黄鱼的黄色素细胞和黑色素细胞。2021年，宋红梅等用胰蛋白酶和胶原酶i消化，成功分离了橘色双冠丽鱼的黄色素细胞和黑色素细胞，并且成功传代，建立了细本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种豹纹鳃棘鲈红色素细胞的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述EDTA消化液中EDTA的浓度为0.04wt%；

3.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述第一消化的时间为20-30min，温度为25℃-28℃，转速为200rpm；

4.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述密度梯度离心包括依次加入体积百分含量为20%的Percoll溶液和体积百分含量为30%的Percoll溶液的步骤。

5.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述鱼鳍包括尾鳍、背鳍和臀鳍中的一种或...

【技术特征摘要】

1.一种豹纹鳃棘鲈红色素细胞的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述edta消化液中edta的浓度为0.04wt%；

3.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述第一消化的时间为20-30min，温度为25℃-28℃，转速为200rpm；

4.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述密度梯度离心包括依次加入体积百分含量为20%的perc...

【专利技术属性】
技术研发人员：文鑫，姜天宇，骆剑，
申请(专利权)人：海南大学三亚南繁研究院，
类型：发明
国别省市：