【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体地说，涉及一种rna解旋酶dhx8融合蛋白及其制备方法与应用。
技术介绍
1、dhx8(deah-box helicase 8)是一种蛋白质编码基因，属于deah盒解旋酶家族，参与rna的剪接过程，并在释放成熟mrna方面起关键作用。这种蛋白质通过与剪接体结合，帮助将剪接后的rna从剪接体中释放出来，使其能够被翻译成蛋白质。
2、dhx8的结构包括一个高度可变的n端域和一个保守的c端解旋酶域，类似于其他deah-box rna解旋酶。在c端解旋酶域中，包含两个reca结构域(reca1和reca2)，这些结构域形成了解旋酶的核心，并参与atp的结合和水解、rna的结合以及解旋酶活性。此外，dhx8还包含翼状螺旋(winged-helix)、类似棘轮的结构以及寡核苷酸结合(ob)折叠结构。研究还发现，dhx8对腺嘌呤丰富的rna有偏好性，并在rna结合后触发atp水解，导致adp的释放。此外，dhx8的特定结构区域，如deah基序、“钩环”和“弯钩”区域，对于其功能至关重要。这些区域被认为是调节rna通过rna结合通道的方向性移动的关键。
3、选择性剪接的异常调节也与各种人类疾病有关，比如癌症。全长型的dhx8蛋白结构庞大而且较为复杂，人dhx8蛋白含有超过1220个氨基酸，包含了多个结构域，广泛参与剪接体中其他蛋白的结合和特定底物的识别等过程。鉴于此，针对dhx8蛋白的表达研究显得极为重要。
4、据研究表明，dhx8蛋白可能是1型人类免疫缺陷病毒(hiv-1)复
5、在癌症研究中，dhx8被提及为结腺癌的预后标志物，并且在多种癌症类型中具有较低的癌症特异性。dhx8蛋白在血浆中的检测结果显示，它在免疫分析、质谱和邻近延伸测定中均未被检测到。研究表明，circdhx8在胃癌(gc)中的表达升高，并且其过表达能够显著提高胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力，同时抑制细胞凋亡。相反，circdhx8的敲低则显著降低了这些效应，并在异种移植肿瘤模型中抑制了肿瘤的生长。
6、已有技术采取的杆状病毒表达系统表达dhx8重组蛋白，其构建过程复杂，耗时耗力，成本高昂，且提纯的蛋白不适合开展高通量的抑制抑制剂筛选。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术目的在于提供一种dhx8融合蛋白及其制备方法，以解决现有技术存在的问题。
2、本专利技术的目的及其技术问题解决可以通过以下实施方案来实现。
3、一方面，本专利技术提供了具有atp水解酶和解旋酶酶活性的dhx8融合蛋白，该融合蛋白的氨基酸序列如seq id no:1所示。
4、与人rna解旋酶dhx8全长蛋白相比，dhx8融合蛋白的n末端缺失了234个氨基酸，但增加了融合标签，即硫氧还原蛋白；c末端缺失了263个氨基酸，但增加了纯化标签，即组氨酸标签(his-tag)。
5、因此，在本专利技术的实施方案中，dhx8融合蛋白的n末端具有融合标签即硫氧还原蛋白a(trxa)。
6、在第二方面，本专利技术提供了编码dhx8融合蛋白的核酸。
7、在本专利技术的实施方案中，该核酸的核苷酸序列如seq id no:2所示。
8、在第三方面，本专利技术提供了表达载体，该表达载体含有编码dhx8融合蛋白的核酸。
9、在本专利技术优选的实施方案中，表达载体是细菌表达载体，例如pet.32m.3c。
10、在第四方面，本专利技术提供了含有上述表达载体的菌株。
11、在优选的实施方案中，上述菌株可以为e.coli菌株，例如rosetta(de3)或bl21(de3)，或bl21 plyss。
12、在第五方面，本专利技术提供了dhx8融合蛋白的制备方法，包括如下步骤：
13、1)扩增编码dhx8融合蛋白的核酸序列；
14、2)将所述核酸序列克隆到原核表达载体；
15、3)将所述原核表达载体转化到e.coli菌株中；
16、4)诱导所述dhx8融合蛋白的表达，以及
17、5)纯化所述dhx8融合蛋白，
18、在本专利技术的具体实施方案中，原核表达载体可以为细菌表达载体，例如pet.32m.3c。
19、在本专利技术的具体实施方案中，e.coli菌株可以为rosetta(de3)、bl21(de3)或bl21plyss。
20、在本专利技术的具体实施方案中，纯化可以通过例如亲和层析进行。
21、在第六方面，本专利技术提供了dhx8融合蛋白在制备解开寡聚核酸双链结构的制剂中的用途。
22、在第七方面，本专利技术提供了dhx8融合蛋白在rna修饰和加工中的应用，优选在参与mrna剪切中的用途。
23、在第八方面，本专利技术提供了dhx8融合蛋白在高通量筛选dhx8解旋酶或atp水解酶活性抑制剂中的用途。。
24、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果。具体而言，本专利技术的dhx8融合蛋白具有atp水解酶和解旋酶活性，可以用于dhx8活性分析，特别有利于dhx8蛋白抑制剂的高通量筛选、分子间相互作用、抗体与检测试剂盒制备等生理生化操作，同时其可溶性强，表达效率高，纯化工艺简单。本专利技术通过e.coli表达系统表达dhx8融合蛋白，由于细菌培养的生长周期快，效率高，因此短时间可制备足量的dhx8融合蛋白，适合dhx8酶活性抑制剂的高通量筛选，克服了由于天然dhx8分子量过大(总长1221个氨基酸)，空间结构复杂无法通过基因工程方法制备的问题；本专利技术通过基因工程融合蛋白技术选择天然人rna解旋酶dhx8部分区域，并辅以硫氧还原蛋白，对融合蛋白进行原核表达；相比于现有技术采用的昆虫表达体系杆状病毒表达系统，克服了其构建复杂，纯化过程困难，花费大的缺点。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.具有ATP水解酶和解旋酶酶活性的DHX8融合蛋白，其特征在于，所述DHX8融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.根据权利要求1所述表达的DHX8融合蛋白，其特征在于，所述DHX8融合蛋白的N末端具有融合标签硫氧还原蛋白A(TrxA)。
3.核酸，编码权利要求1所述的DHX8融合蛋白。
4.根据权利要求3所述的核酸，其特征在于，所述核酸的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
5.表达载体，其特征在于，所述表达载体含有权利要求3所述的核酸，优选所述表达载体是细菌表达载体，例如pET.32m.3c。
6.菌株，其特征在于，所述菌株含有权利要求5所述的表达载体，优选所述菌株为E.coli菌株，例如Rosetta(DE3)、BL21(DE3)或BL21 pLysS。
7.DHX8融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
8.权利要求1所述DHX8融合蛋白在制备解开寡聚核酸双链结构的制剂中的用途。
9.权利要求1所述DHX8融合蛋白在RNA修饰和加工中的应用
10.权利要求1所述蛋白在高通量筛选DHX8解旋酶或ATP水解酶活性抑制剂中的用途。
...【技术特征摘要】
1.具有atp水解酶和解旋酶酶活性的dhx8融合蛋白，其特征在于，所述dhx8融合蛋白的氨基酸序列如seq id no:1所示。
2.根据权利要求1所述表达的dhx8融合蛋白，其特征在于，所述dhx8融合蛋白的n末端具有融合标签硫氧还原蛋白a(trxa)。
3.核酸，编码权利要求1所述的dhx8融合蛋白。
4.根据权利要求3所述的核酸，其特征在于，所述核酸的核苷酸序列如seq id no:2所示。
5.表达载体，其特征在于，所述表达载体含有权利要求3所述的核酸，优选所述表达载体是细菌表达载体，例如pet.32m...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨梦霞，冯赛，邓园莲，张严冬，
申请(专利权)人：深圳开悦生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。