一种用于体外转录mRNA的质粒载体、构建方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种核酸分子，包含1)可转录的核酸片段和/或用于引入可转录的核酸片段的核酸；2)polyA核酸片段；3)回旋酶结合位点核酸片段。本发明专利技术所述核酸分子可提升Poly A的稳定性，解决Poly A丢失/缩短问题，同时也可提升核酸分子的稳定性减少质粒在扩增期间的重组概率，有利于mRNA产品的工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程领域。具体地，涉及一种能够提高质粒稳定性的mrna体外转录载体、构建方法及其应用。

技术介绍

1、mrna技术有许多优点：首先mrna不会整合到基因组中，从而避免了对插入突变的担忧；更重要的是，mrna与相对稳定的dna不同，行使过功能的mrna随后便会降解，不会对人体产生其他的毒害或副作用；mrna可以以无细胞的方式制造，可通过体外转录技术快速、经济地大规模生产，因其研发周期短，从而可以实现快速、经济、高效的生产。此外，单个mrna可以编码多种抗原、蛋白或多肽，工艺适用性强，理论上任何蛋白都可以被表达。

2、mrna新冠疫苗已经验证了mrna技术平台在疫苗领域的适用性。除了新冠疫苗，mrna技术还可被广泛应用于传染病、肿瘤以及蛋白替换疗法等领域。

3、对于mrna技术来说，良好的生产工艺起始于安全稳定高效的质粒载体设计。无论是从工艺生产的角度，还是治疗或者监管的角度，质粒dna中大部分非必要序列均应被去除，使分子量尽可能减少，以便基因操作，因为质粒太大，会对宿主菌施加巨大的代谢负荷，减少细胞用于质粒复制的资源本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含1)可转录的核酸片段和/或用于引入可转录的核酸片段的核酸；2)包含多聚脱氧腺苷酸polyA的核酸片段；3)包含回旋酶结合位点的核酸片段。

2.如权利要求1所述的核酸分子，其特征在于，所述可转录的核酸片段编码肽或蛋白。

3.如权利要求1或2所述的核酸分子，其特征在于，所述用于引入可转录的核酸片段的核酸片段包括多克隆位点或同源重组位点。

4.如权利要求1-3中任一项所述的核酸分子，其特征在于，所述polyA包括至少50个连续的脱氧腺苷酸。

5.如权利要求1-4中任一项所述的核酸分子，其特征在于，所述...

【技术特征摘要】

1.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含1)可转录的核酸片段和/或用于引入可转录的核酸片段的核酸；2)包含多聚脱氧腺苷酸polya的核酸片段；3)包含回旋酶结合位点的核酸片段。

2.如权利要求1所述的核酸分子，其特征在于，所述可转录的核酸片段编码肽或蛋白。

3.如权利要求1或2所述的核酸分子，其特征在于，所述用于引入可转录的核酸片段的核酸片段包括多克隆位点或同源重组位点。

4.如权利要求1-3中任一项所述的核酸分子，其特征在于，所述polya包括至少50个连续的脱氧腺苷酸。

5.如权利要求1-4中任一项所述的核酸分子，其特征在于，所述包含polya的核酸片段包括至少2个长度为至少20个连续脱氧腺苷酸序列的元件，所述2个元件中间至少间隔一个非t脱氧核苷酸。

6.如权利要求1-5中任一项所述的核酸分子，其特征在于，所述包含回旋酶结合位点的核酸片段来源于病毒或细菌；优选的，所述包含回旋酶结合位点的核酸片段来源于病毒；更优选的，所述包含回旋酶结合位点的核酸片段来源于噬菌体。

7.如权利要求1-5中任一项所述的核酸分子，其特征在于，所述包含回旋酶结合位点的核酸片段来源于质粒；优选的，所述包含回旋酶结合位点的核酸片段来源于cole1型质粒。

8.一种质粒载体，其特征在于，所述质粒载体包含1)编码mrna分子的第一核酸片段；2)包含polya的第二核酸片段；3)包含回旋酶结合位点的第三核酸片段。

9.一种质粒载体的制备方法，其特征在于，将如权利要求8所述的质粒载体转化到大肠杆菌感受态细胞，取适量涂布于抗性lb培养基平板培养，挑取单克隆菌落、测序，获得测序正确的阳性菌液，后进行大规模培养。

10.一种扩增核酸分子的方法，其特征在于，包括在宿主细胞中繁殖权利要求1-7所述的核酸分子和繁殖所述宿主细胞，所述宿主细胞包括细菌或真菌；所述宿主细胞优选为大肠杆菌。

11.一种获得rna的方法，其特征在于，包括根据权利要求10方法扩增核酸分子，将核酸分子作为模版在体外转录成rna。

12.一种获得肽或蛋白质的方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：李荩，刘性坡，吴汉，王浩猛，刘健，朱涛，邱东旭，宇学峰，
申请(专利权)人：康希诺上海生物研发有限公司，
类型：发明
国别省市：