【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及维生素检测，具体涉及维生素b12磁微粒化学发光检测试剂盒及其检测方法和应用。
技术介绍
1、维生素b12(vitamin b12，vb12)，又被称为钴胺素，属于含有咕啉环结构的类咕啉化合物家族。vb12在人体健康中扮演着重要角色，对于维持正常的血液生成(造血)和神经系统功能的运作至关重要。它深度参与细胞的代谢过程，不仅影响dna的合成与调控机制，还直接参与脂肪酸的生成以及能量转换的生化反应。因此在日常生活中，它广泛应用于营养补充品、食物添加剂以增强其营养价值，亦被用作药品成分(吕颖坚,黄俊明.维生素b12的研究进展[j].中国食品卫生杂志,2012,24(04):394-399.)。
2、vb12的摄取不足和缺乏与多种隐形疾病有关，也会引发多种疾病。如恶性贫血、高同型半胱氨酸血症、亚急性联合变性、精神抑郁及其它神经系统疾病、甲基丙二酸血症、获得性吸收不良、出生缺陷等疾病都与vb12的缺乏密切相关。因此，vb12作为诊断标志物，在医学领域具有重要的临床意义(冯晓婷.维生素b12缺乏与相关疾病的关系[j].中国实用神经疾病杂志,2014,17(01):96-99.)。
3、然而血液循环的vb12有相当一部分与转钴胺素ii(tc)结合，因此要检测血液中的vb12需要将vb12解离下来才能更为准确的反应其含量，同时，解离下来的体内vb12不能长时间稳定存在，易被破坏，更加大了检测难度。尽管质谱分析的准确性好，但针对vb12样本前处理复杂，检测过程繁琐，时间和经济成本高。免疫层析、酶联等检测方式则受
4、由于血液中vb12检测的特殊性，当前市面上的vb12化学发光法检测试剂配方均配置有解离剂或适配了商业解离方案，但方案中多采用剧毒性的金属氰化物作为络合剂，对人体和环境危害极高。此外，这些配方内的还原剂等其它解离剂组分通常使用的物质均毒性较高，成本高，但最终解离vb12样本的性能良莠不齐(陈伟才,李忠信,渠海,等.叶酸及维生素b12检测方法的发展及现状[j].分子诊断与治疗杂志,2015,7(05):357-360+356.)。
5、基于上述原因，亟需对检测vb12的试剂和方法进行改进，以在避免使用有毒物质的前提下提升vb12的检测效果。
技术实现思路
1、本专利技术意在提供维生素b12磁微粒化学发光检测试剂盒，以解决现有技术的检测维生素b12的方法和试剂中含有剧毒性物质且检测效果不理想的技术问题。
2、为达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、维生素b12磁微粒化学发光检测试剂盒，其包括m试剂、r试剂、第一解离剂和第二解离剂；
4、所述m试剂包括胃内因子包被的链霉亲和素磁珠；
5、所述r试剂包括吖啶酯标记的vb12；
6、所述第一解离剂包括蛋白释放剂和络合剂；
7、所述第二解离剂包括缓冲液和还原剂。
8、在一些实施方案中，m试剂由胃内因子包被的链霉亲和素磁珠分散于mes缓冲液形成；胃内因子包被的链霉亲和素磁珠的浓度为0.2-0.8mg/ml；
9、mes缓冲液为含有0.03-0.8m mes、ph值为5.5-6.7的溶液；
10、优选地，mes的浓度为0.5m；ph值为5.8-6.4；
11、进一步优选地，ph值为6.0-6.2。
12、在一些实施方案中，胃内因子包被的链霉亲和素磁珠由如下方法制备：使用洗涤缓冲液洗涤链霉亲和素磁珠2-5次，然后按照胃内因子与链霉亲和素磁珠的质量比为1:3000-1:10000的比例加入胃内因子，混合后，在20-37℃温度下混匀孵育25-35min；使用洗涤缓冲液洗涤2-5次，再使用mes缓冲液重悬，即得；
13、洗涤缓冲液为含有0.01-0.0.06m pbs和0.02％-3％吐温20、ph为6.8-7.6的溶液；
14、优选地，pbs的浓度为0.02m，吐温的浓度为0.05％，ph值为7.4。
15、在一些实施方案中，r试剂为使用hepes缓冲液按照1:5000-1:20000的稀释比稀释吖啶酯标记的vb12形成；优选地，稀释比为1:12500；
16、hepes缓冲液为含有0.01-0.2m hepes、ph值为6.8-8.2的溶液；
17、优选地，hepes的浓度为0.1m，ph值为6.8-8.2；
18、进一步优选地，ph值为7.2-7.6；
19、更进一步优选地，ph值为7.4。
20、在一些实施方案中，蛋白释放剂为氢氧化钠，络合剂为含氰根的有机化合物；
21、第一解离剂以水为溶剂配制，氢氧化钠的浓度为0.1-0.8m，含氰根的有机化合物的浓度为1-8mg/l；
22、优选地，氢氧化钠的浓度为0.3-0.6m，含氰根的有机化合物的浓度为3-6mg/l；
23、进一步优选地，氢氧化钠的浓度为0.4-0.5m，含氰根的有机化合物的浓度为4-5mg/l。
24、在一些实施方案中，含氰根的有机化合物为氰酸甲酯和/或氰酸乙酯。
25、在一些实施方案中，缓冲液为柠檬酸缓冲液，还原剂为巯基乙醇；
26、巯基乙醇在柠檬酸缓冲液中的浓度为10-40g/l；
27、优选地，巯基乙醇的浓度为20-30g/l；
28、进一步优选地，巯基乙醇的浓度为25g/l。
29、在一些实施方案中，柠檬酸盐缓冲溶液由0.1-0.5mol/l磷酸氢二钠溶液和0.1-0.5mol/l柠檬酸溶液按照59-83：17-41的体积比混合而成；柠檬酸盐缓冲溶液的ph值为5.0-6.0；
30、优选地，柠檬酸盐缓冲溶液的ph值为5.5。
31、在一些实施方案中，维生素b12磁微粒化学发光检测试剂盒，还包括校准品和质控品；
32、所述校准品为使用校准品缓冲液为溶剂配制的维生素b12的浓度为0、100、200、400、800或1600pg/ml的维生素b12溶液；
33、校准品缓冲液为含有0.01-0.06m pbs和0.02％-3％吐温20、ph为6.8-7.6的溶液；
34、优选地，pbs的浓度为0.02m，吐温的浓度为0.05％，ph值为7.4；
35、所述质控品为使用质控品缓冲液为溶剂配制的维生素b12的浓度为200或800pg/ml的维生素b12溶液；
36、质控品缓冲液为含有0.01-0.06m pbs和0.02％-3％吐温20、ph为6.8-7.6的溶液；
37、优选地，pbs的浓度为0.本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.维生素B12磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，其包括M试剂、R试剂、第一解离剂和第二解离剂；
2.根据权利要求1所述的维生素B12磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，M试剂由胃内因子包被的链霉亲和素磁珠分散于MES缓冲液形成；胃内因子包被的链霉亲和素磁珠的浓度为0.2-0.8mg/mL；
3.根据权利要求2所述的维生素B12磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，胃内因子包被的链霉亲和素磁珠由如下方法制备：使用洗涤缓冲液洗涤链霉亲和素磁珠2-5次，然后按照胃内因子与链霉亲和素磁珠的质量比为1:3000-1:10000的比例加入胃内因子，混合后，在20-37℃温度下混匀孵育25-35min；使用洗涤缓冲液洗涤2-5次，再使用MES缓冲液重悬，即得；
4.根据权利要求1所述的维生素B12磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，R试剂为使用HEPES缓冲液按照1:5000-1:20000的稀释比稀释吖啶酯标记的VB12形成；优选地，稀释比为1:12500；
5.根据权利要求1所述的维生素B12磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，蛋
6.根据权利要求5所述的维生素B12磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，含氰根的有机化合物为氰酸甲酯和/或氰酸乙酯。
7.根据权利要求1所述的维生素B12磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，缓冲液为柠檬酸缓冲液，还原剂为巯基乙醇；
8.根据权利要求7所述的维生素B12磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，柠檬酸盐缓冲溶液由0.1-0.5mol/L磷酸氢二钠溶液和0.1-0.5mol/L柠檬酸溶液按照59-83：17-41的体积比混合而成；柠檬酸盐缓冲溶液的pH值为5.0-6.0；
9.根据权利要求8所述的维生素B12磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，还包括校准品和质控品；
10.使用权利要求1-9中任意一项所述的维生素B12磁微粒化学发光检测试剂盒进行维生素B12检测的非疾病的质量或者诊断的方法，其特征在于，包括以下依次进行的步骤：
...【技术特征摘要】
1.维生素b12磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，其包括m试剂、r试剂、第一解离剂和第二解离剂；
2.根据权利要求1所述的维生素b12磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，m试剂由胃内因子包被的链霉亲和素磁珠分散于mes缓冲液形成；胃内因子包被的链霉亲和素磁珠的浓度为0.2-0.8mg/ml；
3.根据权利要求2所述的维生素b12磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，胃内因子包被的链霉亲和素磁珠由如下方法制备：使用洗涤缓冲液洗涤链霉亲和素磁珠2-5次，然后按照胃内因子与链霉亲和素磁珠的质量比为1:3000-1:10000的比例加入胃内因子，混合后，在20-37℃温度下混匀孵育25-35min；使用洗涤缓冲液洗涤2-5次，再使用mes缓冲液重悬，即得；
4.根据权利要求1所述的维生素b12磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，r试剂为使用hepes缓冲液按照1:5000-1:20000的稀释比稀释吖啶酯标记的vb12形成；优选地，稀释比为1:12500；
5.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员：龚柳宇，马洪超，孙婵，张亚兰，刘毅，
申请(专利权)人：重庆新赛亚生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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