一种响应葡萄糖变化表达胰岛素的间充质干细胞制备方法技术

技术编号:45033195 阅读:24 留言:0更新日期:2025-04-18 17:13
本发明专利技术涉及糖尿病治疗技术领域,公开了一种响应葡萄糖变化表达胰岛素的间充质干细胞制备方法,该方法首先克隆并筛选出可响应葡萄糖变化调节基因表达的启动子;然后构建响应葡萄糖变化表达胰岛素融合基因的慢病毒载体,将筛选出的启动子替代慢病毒载体上的原有启动子,驱动下游胰岛素融合基因的表达;接着将构建好的慢病毒载体和包装载体转染293T细胞完成慢病毒包装,收集含慢病毒的细胞培养液,用其培养间充质干细胞,使慢病毒侵染间充质干细胞,再利用嘌呤霉素筛选并稀释筛选单克隆细胞,最终得到响应葡萄糖变化表达胰岛素的间充质干细胞。本发明专利技术制备的间充质干细胞,其能够模拟人和动物体内血糖变化表达胰岛素,为糖尿病的治疗提供了新的手段。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及糖尿病治疗,尤其涉及一种响应葡萄糖变化表达胰岛素的间充质干细胞制备方法


技术介绍

1、糖尿病是一种以高血糖为特征的慢性代谢性疾病,晚期会引发多种严重并发症,给患者健康和医疗资源带来巨大负担。目前,ⅰ型糖尿病和晚期ⅱ型糖尿病的治疗主要依赖注射胰岛素,但难以阻止并发症的发生。随着干细胞生物学和细胞治疗手段的发展,利用胚胎干细胞或诱导多能干细胞分化成胰岛细胞治疗糖尿病存在致瘤性、免疫排斥、分化效率低、成本昂贵等问题;而利用异体或自体的成体间充质干细胞治疗糖尿病虽能避免致瘤性和免疫排斥,但仍面临诸多难题,如直接注射间充质干细胞效果不佳,间充质干细胞分化胰岛细胞效率低且技术繁琐、价格昂贵,强制表达胰岛素治疗糖尿病又存在胰岛素表达不稳定或基因沉默等困难。

2、专利号为zl202110434985.9的专利技术专利公开了一种在间充质干细胞中稳定表达可分泌胰岛素的方法,该方法利用融合蛋白表达技术和2a自切割技术建立了在间充质干细胞中稳定和分泌表达胰岛素的方法,解决了间充质干细胞不能稳定表达和分泌胰岛素的问题。但是其存在不能响应葡萄糖浓度变化表达本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种响应葡萄糖变化表达胰岛素的间充质干细胞制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.如权利要求1所述的响应葡萄糖变化表达胰岛素的间充质干细胞制备方法,其特征在于,所述步骤S1.1中响应葡萄糖浓度调节基因表达启动子的确定,具体步骤为:

3.如权利要求1所述的响应葡萄糖变化表达胰岛素的间充质干细胞制备方法,其特征在于,所述步骤S1.2中引物设计与PCR扩增启动子的具体步骤为:

4.如权利要求1所述的响应葡萄糖变化表达胰岛素的间充质干细胞制备方法,其特征在于,所述步骤S1.3中启动子驱动的报告基因克隆的具体步骤为:

5.如权利要求1所述的响应...

【技术特征摘要】

1.一种响应葡萄糖变化表达胰岛素的间充质干细胞制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.如权利要求1所述的响应葡萄糖变化表达胰岛素的间充质干细胞制备方法,其特征在于,所述步骤s1.1中响应葡萄糖浓度调节基因表达启动子的确定,具体步骤为:

3.如权利要求1所述的响应葡萄糖变化表达胰岛素的间充质干细胞制备方法,其特征在于,所述步骤s1.2中引物设计与pcr扩增启动子的具体步骤为:

4.如权利要求1所述的响应葡萄糖变化表达胰岛素的间充质干细胞制备方法,其特征在于,所述步骤s1.3中启动子驱动的报告基因克隆的具体步骤为:

5.如权利要求1所述的响应葡萄糖变化表达胰岛素的间充质干细胞制备方法,其特征在于,所述步...

【专利技术属性】
技术研发人员:邓文生杨优李永卓
申请(专利权)人:武汉科技大学
类型:发明
国别省市:

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