一种以隐秘质粒为表达载体的高产β-丙氨酸的工程菌及双碳源发酵方法技术

本发明专利技术公开了一种以隐秘质粒为表达载体的高产β‑丙氨酸的工程菌及双碳源发酵方法，所述工程菌敲除底盘菌基因组中pckA基因、lacI基因、asnA基因、ygeA基因、gldA基因、nadB基因、dhaK基因中的一种或多种，和/或过表达glpF基因、glpD基因、yddG基因、ydcZ基因、rocG基因、glnA基因中的一种或多种构建获得的；所述yddG基因、ydcZ基因、rocG基因采用高拷贝隐秘质粒pMUT1进行过表达。本发明专利技术以葡萄糖和甘油为碳源，将工程菌β‑丙氨酸产量提高至原产量的3倍左右的水平，减少了发酵过程诱导剂的添加成本，发酵生产过程安全无污染。

【技术实现步骤摘要】

(一)本专利技术涉及一种以隐秘质粒为表达载体的高产β-丙氨酸的工程菌及双碳源发酵方法。

技术介绍

0、(二)
技术介绍

1、大肠杆菌nissle 1917(ecn)是一种革兰氏阴性益生菌，它可以通过加强肠道粘膜屏障和刺激免疫系统来防止病原体感染，可用于预防和治疗胃肠道功能障碍和免疫性疾病。此外，ecn具备生长快速等特点，被认为是生产代谢产物的理想平台，适用于工业方面的生产发酵。

2、目前，以大肠杆菌ecn作为底盘细胞的开发研究相对较少，ecn生产β-丙氨酸的代谢途径与其他底盘菌株存在差异，这增加了研究的难度。此外，ecn作为一种益生菌，不产生毒力因子，这一特性使其构建的工程菌株能够直接应用于畜牧业饲料，并作为营养添加剂。前期实验显示，ecn的生长速率较快，其od600值高于其他大肠杆菌菌株，且对β-丙氨酸表现出极高的耐受性，这些特点进一步凸显了ecn作为底盘细胞的开发潜力。最后，在野生型ecn中含有两个隐性质粒pmut1和pmut2。去除这两个隐性质粒的无质粒ecn是构建代谢工程菌株的首选，主要是因为隐性质粒相比于其他质粒的兼容性更好本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种以隐秘质粒为表达载体的高产β-丙氨酸的工程菌，其特征在于，所述工程菌以E.coli Nissle1917ΔcycAΔfumB1ΔaspCΔpyk/pGLO-PJ23100-panDK43Y-aspB/pSU19-PJ23100-ppC-aspA为底盘菌，敲除基因组中pckA基因、lacI基因、asnA基因、ygeA基因、gldA基因、nadB基因、dhaK基因中的一种或多种，和/或过表达glpF基因、glpD基因、yddG基因、ydcZ基因、rocG基因、glnA基因中的一种或多种构建获得的；所述yddG基因、ydcZ基因、rocG基因采用高拷贝隐秘质粒pMUT1进行过表达。...

【技术特征摘要】

1.一种以隐秘质粒为表达载体的高产β-丙氨酸的工程菌，其特征在于，所述工程菌以e.coli nissle1917δcycaδfumb1δaspcδpyk/pglo-pj23100-pandk43y-aspb/psu19-pj23100-ppc-aspa为底盘菌，敲除基因组中pcka基因、laci基因、asna基因、ygea基因、glda基因、nadb基因、dhak基因中的一种或多种，和/或过表达glpf基因、glpd基因、yddg基因、ydcz基因、rocg基因、glna基因中的一种或多种构建获得的；所述yddg基因、ydcz基因、rocg基因采用高拷贝隐秘质粒pmut1进行过表达。

2.如权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述yddg基因、ydcz基因、rocg基因采用启动子pj23100表达，所述glpf基因、glpd基因、glna基因采用启动子ptac表达，所述启动子ptac核苷酸序列如seq id no.1所示。

3.如权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述glpf基因、glpd基因、glna基因采用中拷贝质粒psu19进行过表达。

4.如权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述yddg基因核苷酸序列如ncbi中nz_cp007799.1的1667167-1668048所示，ydcz基因核苷酸序列如ncbi中nz_cp007799.1的1636228-1636677所示...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙东昌，张楠，孙志永，宋增科，胡诗龙，焦玲玲，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：