【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程药物，具体涉及高热稳、高透皮吸收的重组ⅲ型胶原蛋白及应用。
技术介绍
1、胶原蛋白是人体内最为含量丰富的蛋白质，其广泛应用于医药、美容和食品等多个行业，并且胶原蛋白也是动物体内分布最为广泛、含量最为突出的一种纤维状的功能性蛋白，在人体的总蛋白含量占比约25-30％。根据有关报道，胶原蛋白是一类蛋白质家族，类型丰富，人体内存在高达28种胶原蛋白，其中研究较多的为ⅰ型、ⅱ型和ⅲ型胶原蛋白，在整个人体胶原蛋白中占比约60％-80％。而ⅲ型胶原蛋白在细胞外基质的结构组织和功能调控中则起着调控作用，参与许多体内生理活动，如结构支撑、细胞分化和黏附、炎症相关疾病以及某些其他的疾病。
2、传统的天然胶原蛋白由于其生物相容性和生物降解性等理化性质，常应用于化妆、医学材料和食品加工等多种产业，但由于其相对分子质量较大的特性，所以并不易被人体所吸收，因此如何提高胶原蛋白的吸收特性成为了当下攻坚克难的热点与难点之一。
3、而相较于天然胶原蛋白存在相对分子质量较大、免疫原性、成分复杂和不易纯化等缺点，重组胶原蛋白则克服了这些缺陷，大大提高了胶原蛋白的利用效率，有效保证了以胶原蛋白为原料的胶原蛋白产品的生物安全性。
4、通过在基因上游构建一段分泌肽核心序列以提高外源蛋白的分泌水平和表达水平这一思路，自上世纪90年代一经提出，便被广泛地加以应用。其作用机理是在分泌性蛋白质合成过程中，信号肽引导分泌性蛋白质到达并且通过内质网，以促进该蛋白进一步被分泌至胞外。
5、本专利技术在实验中进一步发
6、基于此，本专利技术设计了高热稳、高透皮吸收的重组ⅲ型胶原蛋白及应用以解决上述问题。
技术实现思路
1、针对现有技术所存在的上述缺点，本专利技术提供了高热稳、高透皮吸收的重组ⅲ型胶原蛋白及应用。
2、为实现以上目的，本专利技术通过以下技术方案予以实现：
3、高热稳、高透皮吸收的重组ⅲ型胶原蛋白，其氨基酸序列如seq id no.1所示。
4、为了更好地实现本专利技术的目的，本专利技术还提供了所述的高热稳、高透皮吸收的重组ⅲ型胶原蛋白的制备方法，在胶原蛋白活性片段基因上游插入分泌肽的核心氨基酸序列，在胶原蛋白活性片段基因下游添加纯化的标签；之后将此基因序列在宿主菌中进行蛋白表达与纯化；
5、其中，胶原蛋白活性片段的氨基酸序列如seq id no.3所示；
6、分泌肽的核心氨基酸序列如seq id no.2所示。
7、更进一步的，所述标签为his-tag，其氨基酸序列如seq id no.4所示。
8、更进一步的，以大肠杆菌为宿主菌。
9、为了更好地实现本专利技术的目的，本专利技术还提供了一种编码基因，用于编码所述的高热稳、高透皮吸收的重组ⅲ型胶原蛋白的制备方法中胶原蛋白活性片段，其核苷酸序列如seq id no.5所示。
10、为了更好地实现本专利技术的目的，本专利技术还提供了一种表达载体，通过将含有分泌肽的核心氨基酸序列的胶原蛋白活性片段基因连接到pet-28a载体，构建重组质粒分泌肽-胶原蛋白-pet-28a。
11、为了更好地实现本专利技术的目的，本专利技术还提供了用于表达所述的高热稳、高透皮吸收的重组ⅲ型胶原蛋白的菌株，将所述的表达载体转化至大肠杆菌感受态细胞。
12、为了更好地实现本专利技术的目的，本专利技术还提供了所述的高热稳、高透皮吸收的重组ⅲ型胶原蛋白的表达方法，将所述的菌株接种到lb培养基中，37℃下加入iptg培养诱导表达3.8～4.2h后，收集上清，纯化后得到重组ⅲ型胶原蛋白。
13、为了更好地实现本专利技术的目的，本专利技术还提供了所述的重组ⅲ型胶原蛋白在制备生物药品/化妆品中的应用。
14、为了更好地实现本专利技术的目的，本专利技术还提供了所述的重组ⅲ型胶原蛋白在制备具有促进透皮吸收功能或耐受至少97℃高温的产品中的应用。
15、本专利技术相较于现有技术，其有益效果为：1、本专利技术通过高透皮性实验，验证了含有分泌肽的胶原蛋白透过量则明显高于同时刻无分泌肽的胶原蛋白，并且两者差异呈显著性差异，本专利技术的重组ⅲ型胶原蛋白克服了天然胶原蛋白的难吸收性，显示更高的透皮吸收效应。可以用作制备具有促进透皮吸收功能的生物药品/化妆品中。
16、2、本专利技术通过细胞毒性实验，验证了添加重组ⅲ型胶原蛋白24h后，蛋白浓度在0.2mg/ml以下时，hacat细胞正常生长，为1级细胞毒性，对细胞产生的影响轻微。
17、3、本专利技术通过细胞划痕实验，验证了在24h时，重组ⅲ型胶原蛋白对hacat细胞有着较为明显的促迁移效果。其可应用在制备损伤修复治疗、抗皱等产品。
18、4、本专利技术通过热稳定性实验，验证了当温度逐渐升高，重组ⅲ型胶原蛋白依然无凝胶化或絮状物，并且在sds-page电泳下依然保持基本大小，没有出现降解，表明本专利技术制备重组ⅲ型胶原蛋白具有高热稳定性。可以用作制备耐受至少97℃高温的生物药品/化妆品中。
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1.高热稳、高透皮吸收的重组Ⅲ型胶原蛋白，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。
2.一种根据权利要求1所述的高热稳、高透皮吸收的重组Ⅲ型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，在胶原蛋白活性片段基因上游插入分泌肽的核心氨基酸序列，在胶原蛋白活性片段基因下游添加纯化的标签；之后将此基因序列在宿主菌中进行蛋白表达与纯化；
3.根据权利要求2所述的高热稳、高透皮吸收的重组Ⅲ型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述标签为His-tag，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
4.根据权利要求2所述的高热稳、高透皮吸收的重组Ⅲ型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，以大肠杆菌为宿主菌。
5.一种编码基因，其特征在于，用于编码权利要求2所述的高热稳、高透皮吸收的重组Ⅲ型胶原蛋白的制备方法中胶原蛋白活性片段，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。
6.一种表达载体，其特征在于，通过将含有分泌肽的核心氨基酸序列的胶原蛋白活性片段基因连接到pET-28a载体，构建重组质粒分泌肽-胶原蛋白-pET-28a。
7.用于表达
8.高热稳、高透皮吸收的重组Ⅲ型胶原蛋白的表达方法，其特征在于，将权利要求7所述的菌株接种到LB培养基中，37℃下加入IPTG培养诱导表达3.8～4.2h后，收集上清，纯化后得到重组Ⅲ型胶原蛋白。
9.一种根据权利要求1所述的重组Ⅲ型胶原蛋白在制备生物药品/化妆品中的应用。
10.一种根据权利要求1所述的重组Ⅲ型胶原蛋白在制备具有促进透皮吸收功能或耐受至少97℃高温的产品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.高热稳、高透皮吸收的重组ⅲ型胶原蛋白，其特征在于：其氨基酸序列如seq idno.1所示。
2.一种根据权利要求1所述的高热稳、高透皮吸收的重组ⅲ型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，在胶原蛋白活性片段基因上游插入分泌肽的核心氨基酸序列，在胶原蛋白活性片段基因下游添加纯化的标签；之后将此基因序列在宿主菌中进行蛋白表达与纯化；
3.根据权利要求2所述的高热稳、高透皮吸收的重组ⅲ型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述标签为his-tag，其氨基酸序列如seq id no.4所示。
4.根据权利要求2所述的高热稳、高透皮吸收的重组ⅲ型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，以大肠杆菌为宿主菌。
5.一种编码基因，其特征在于，用于编码权利要求2所述的高热稳、高透皮吸收的重组ⅲ型胶原蛋白的制备方法中胶原蛋白活性片段，其核苷...
【专利技术属性】
技术研发人员：洪靖君，翟晋唯，袁冰艳，谭万森，季磊，
申请(专利权)人：安徽大学，
类型：发明
国别省市：
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