一种基于RPA-CRISPR/Cas12检测鸡滑液囊支原体的引物探针组合及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种基于RPA‑CRISPR/Cas12检测鸡滑液囊支原体的引物探针组合及应用，属于基因检测技术领域。所述引物探针组合由如SEQ ID NO.3所示的上游引物序列、如SEQ ID NO.4所示的下游引物序列和如SEQ ID NO.5所示的crRNA探针序列组成。本发明专利技术设计出的引物探针组合，利用RPA扩增技术对核酸进行放大，将产物在crRNA探针的引导下，利用Cas12酶切单链DNA报告序列，通过荧光信号进行检测，能够特异性针对鸡滑液囊支原体进行快速检测，最低检测限可达1copy/μL，不仅能快速检测得到结果，并且解决了当前检测方法不敏感、时间长、成本高等缺点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因检测，特别是涉及一种基于rpa-crispr/cas12检测鸡滑液囊支原体的引物探针组合及应用。

技术介绍

1、滑液囊支原体(mycoplasma synoviae,ms)是鸡群关节感染常见的革兰阴性致病菌，可引起感染性滑膜炎和亚临床呼吸道感染，也可引起蛋壳尖异常综合征。滑液囊支原体主要侵染鸡和火鸡的气囊和关节部位。ms感染会导致鸡出现呼吸道症状及滑膜炎，临床症状和发病程度也会因分离株的不同而有差异。滑液囊炎是禽滑液囊支原体病的典型症状，包括滑液囊肿胀、积液和疼痛，触摸时有明显的温热感，鸡表现为跛行、踱步、无法正常站立，觅食能力低，食欲减退，体质量下降等。禽滑液囊支原体病的主要临床表现是关节炎，病鸡通常在髋关节、膝关节和跖关节等部位出现关节肿胀、发热、疼痛等症状，导致鸡的行动受限。

2、支原体可通过分离培养、血清学方法和分子生物学方法进行检测与鉴定。血清学方法可细分为血清平板凝集(serum plate agglutination,spa)试验、血凝抑制(hemagglutination inhibition,hi)试验和酶联本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于RPA-CRISPR/Cas12检测鸡滑液囊支原体的引物探针组合，其特征在于，由如SEQ ID NO.3所示的上游引物序列、如SEQ ID NO.4所示的下游引物序列和如SEQ IDNO.5所示的crRNA探针序列组成。

2.如权利要求1所述的引物探针组合在制备基于RPA-CRISPR/Cas12检测鸡滑液囊支原体的试剂盒中的应用。

3.一种基于RPA-CRISPR/Cas12检测鸡滑液囊支原体的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物探针组合。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括重组酶聚合酶、dNTP、单链DNA报告序...

【技术特征摘要】

1.一种基于rpa-crispr/cas12检测鸡滑液囊支原体的引物探针组合，其特征在于，由如seq id no.3所示的上游引物序列、如seq id no.4所示的下游引物序列和如seq idno.5所示的crrna探针序列组成。

2.如权利要求1所述的引物探针组合在制备基于rpa-crispr/cas12检测鸡滑液囊支原体的试剂盒中的应用。

3.一种基于rpa-crispr/cas12检测鸡滑液囊支原体的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物探针组合。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括重组酶聚合酶、dntp、单链dna报告序列、缓冲液、cas蛋白和基因组dna提取试剂。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述单链dna报告序列含有ttt、att、tat、tta、aat、ata、taa和aaa中的至少一种。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述单链dna报告序列的5'端用atto425、bodipyfl、fam、oregon green 488、tet、joe、r6g、yakimayellow、vic、hex、quasar570、cy3、ned、tamra、rox、aquaphluor 593、texas red、att...

【专利技术属性】
技术研发人员：郝海红，邢梦然，谢胜松，邹紫莹，张玉倩，黄安雄，阮紫涵，吴莹，杨思诺，马东鑫，谷宇锋，谷帅锋，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：