【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于金花茶组织培养育苗，尤其涉及金花茶高诱导率外植体制备和初代诱导培养方法。
技术介绍
1、金花茶(camellia nitidissima chi)系山茶科(theaceae)山茶属(camellia)金花茶组植物，常绿灌木至小乔木，其花为金黄色，耀眼夺目，被称为花卉中“超级明星”、“茶族皇后”及植物界的“大熊猫”，根据《世界自然保护联盟濒危物种红色名录》(iucn)，金花茶被列为极危物种(cr)，为国家一级保护植物，是世界珍贵且稀有的观赏植物和种质资源。金花茶集观赏价值、营养价值和药用价值为一体，金花茶不仅花朵色泽鲜艳，具有极高的观赏价值，其花、叶、果均可入药及保健饮料，具有降低胆固醇，降血压，抑制肿瘤，抑菌，抗衰老等功效，具有重要的药用营养价值，市场开发利用前景广阔，受到了广泛关注。
2、随着金花茶价值不断被开发利用，金花茶人工种植面积在逐年扩大，对金花茶苗木的需求量迅速增加，传统的育苗方法已无法满足市场需求，金花茶的繁育技术包括种子繁育、扦插繁育、嫁接繁育、组培快繁和杂交育种等。但由于存在种子繁育结实率、发芽率和出苗率低；扦插和嫁接容易携带母株自身病毒，成活率和生根率低，且受采穗母树穗条产量影响，扩繁较为缓慢；杂交繁育成活率低等技术难题，金花茶依然面临着种苗供需问题。组培快繁具有一致性好，条件可控等优点，是种苗规模化生产的有效途径，是缓解金花茶种苗供给不足问题的关键。近年来，组培快繁在金花茶上的应用越来越多。但目前金花茶组织培养仍然存在各种问题，包括外植体灭菌不彻底，污染率高，初代诱导成功率低，组培
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题是提供一种外植体来源丰富、易获取且诱导率高的金花茶外植体制备和初代诱导培养方法。为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案是：利用营养液促进濒危植物金花茶的种子苗多次抽稍的茎段作为外植体来源，经过灭菌处理后获得外植体，然后为其配制专属的初代诱导出芽培养基和初始芽驯化培养基，通过控制光照培养，从而提高其诱导率，形成一种濒危植物金花茶高诱导率外植体制备和初代诱导培养方法。
2、本专利技术是这样实现的：
3、一种濒危植物金花茶高诱导率外植体制备和初代诱导培养方法，主要操作步骤如下：
4、(1)外植体获取：选取濒危植物金花茶当年采集成熟健康种子沙藏萌发后，装于基质杯中，进行常规育苗管理，待种子苗高≥6cm，剪取上部茎段作为外植体，保留下部茎段≥3.5cm，剪掉上部茎段之后喷施营养液，继续进行常规育苗管理，待萌芽再次长至高≥6cm，可再次剪取上部茎段循环操作；
5、(2)外植体灭菌：将剪取的上部茎段，剪除叶片后修剪为1.5～3cm长短的茎段，用清洁剂刷洗干净，然后放入75％酒精溶液中浸泡0.5～1min，无菌水清洗3～5次，在超净工作台上，选择带有蓝光功能的超声波清洗杯加入灭菌剂，将外植体放入其中超声清洗5～10min，重复一次，无菌水搅拌清洗5次，灭菌滤纸吸干水分，茎段两端分别剪掉0.2～0.5cm；
6、(3)培养基配制：初代诱导培养选用两种培养基，初代诱导出芽培养基配方为：改良ms+2-ip 1.0～2.0mg/l+naa 1.6～1.8mg/l+iba 0.5～1.5mg/l+蔗糖30g/l+琼脂4.5g/l；初始芽驯化培养基配方为：改良wpm+2-ip 0.5～1.0mg/l+naa 0.5～0.8mg/l+ga30.1～0.2mg/l+蔗糖30g/l+琼脂4.5g/l；按照配方配好培养基后，持续煮沸5min，调节ph值至5.8～6.0，分装到培养容器中；
7、(4)初代诱导培养：将灭菌后的外植体垂直插入初代诱导出芽培养基中，待初始芽长至≥2cm时，剪下初始芽，插入初始芽驯化培养基中，将原外植体再次插回初代诱导出芽培养基中，培养室温度控制在25±3℃左右，弱光培养7～10d后，改为正常光培养。
8、优选地，步骤(1)所述基质杯规格为直径11cm×高15cm，基质为红心土:细沙:泥炭土体积比为8:1:1。
9、优选地，步骤(1)所述常规育苗管理为将幼苗置于带遮阴网、可通风的室外育苗大棚内，根据气候，气温太低时在幼苗上方搭建小拱棚覆盖塑料薄膜保温，每2～3天喷淋水1～2次水，每月施n:p:k＝15:10:20的复合肥1次。
10、优选地，步骤(1)所述营养液为0.5～1.0mg/ml naa+0.3～0.6mg/ml ggr+50～80mg/lkh2po3+500～800mg/l nh4no3。
11、优选地，步骤(2)所述灭菌剂由0.05％茶树精油+0.1％hgcl2溶液+0.01％吐温-20组成。
12、优选地，步骤(3)所述的改良wpm和改良ms培养基组成为：
13、
14、优选地，步骤(3)所述培养容器为高度11cm，直径7.6cm，口径5.3cm的350ml玻璃瓶，每瓶加入50～80ml培养基，121℃高压灭菌20min。
15、优选地，步骤(4)所述弱光培养是在自然光照不开灯条件下用2层报纸覆盖在培养容器上方，正常光培养是保持光照强度为2000～3000lx，每天光照12～14h的光培养。
16、优选地，步骤(4)所述剪下初始芽的操作方式为保留芽基部0.2～0.5cm留存于外植体上。
17、本专利技术与现有技术相比的有益效果是：
18、(1)本专利技术在外植体获取和初代诱导培养时均利用金花茶茎段可多次抽稍的原理。外植体获取时选用的是将种子沙藏萌发后培育的幼苗，剪取上部茎段后保留部分芽基部，优化了剪除茎段后保留茎段的高度，并为其配制特定的营养液，促进茎段多次抽稍，循环往复，利用周期可长达1年时间，可获得丰富的外植体材料，显著提高了种子利用率，且获得的外植体材料活力强，幼太化程度高，容易诱导出芽；初代诱导出芽后剪除初始芽后保留部分芽体在外植体上，将原外植体再次插入筛选配制的特定的初代诱导出芽培养基中，可再次萌发出芽，显著提高了诱导率，诱导率可达96.5％，可在短期内获得大量培养材料，为进一步组培繁育应用研究奠定材料基础。
19、(2)现有技术中多利用成熟茎段和种子作为外植体来源，直接利用成熟茎段作为外植体材料，由于木质化程度较高，诱导率显著本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种濒危植物金花茶高诱导率外植体制备和初代诱导培养方法，其特征在于：包括外植体获取、外植体灭菌、培养基配制和初代诱导培养，主要操作步骤如下：
2.根据权利要求1所述的一种濒危植物金花茶高诱导率外植体制备和初代诱导培养方法，其特征在于：步骤(1)所述基质杯规格为直径11cm×高15cm，基质为红心土:细沙:泥炭土体积比为8:1:1。
3.根据权利要求1所述的一种濒危植物金花茶高诱导率外植体制备和初代诱导培养方法，其特征在于：步骤(1)所述常规育苗管理为将幼苗置于带遮阴网、可通风的室外育苗大棚内，根据气候，气温太低时在幼苗上方搭建小拱棚覆盖塑料薄膜保温，每2～3天喷淋水1～2次水，每月施N:P:K＝15:10:20的复合肥1次。
4.根据权利要求1所述的一种濒危植物金花茶高诱导率外植体制备和初代诱导培养方法，其特征在于：步骤(1)所述营养液为0.5～1.0mg/mL NAA+0.3～0.6mg/mL GGR+50～80mg/L KH2PO3+500～800mg/L NH4NO3。
5.根据权利要求1所述的一种濒危植物金花茶高诱导率外
6.根据权利要求1所述的一种濒危植物金花茶高诱导率外植体制备和初代诱导培养方法，其特征在于：步骤(3)所述的改良WPM和改良MS培养基组成为：
7.根据权利要求1所述的一种濒危植物金花茶高诱导率外植体制备和初代诱导培养方法，其特征在于：步骤(3)所述培养容器为高度11cm，直径7.6cm，口径5.3cm的350mL玻璃瓶，每瓶加入50～80mL培养基，121℃高压灭菌20min。
8.根据权利要求1所述的一种濒危植物金花茶高诱导率外植体制备和初代诱导培养方法，其特征在于：步骤(4)所述弱光培养是在自然光照不开灯条件下用2层报纸覆盖在培养容器上方，正常光培养是保持光照强度为2000～3000LX，每天光照12～14h的光培养。
9.根据权利要求1所述的一种濒危植物金花茶高诱导率外植体制备和初代诱导培养方法，其特征在于：步骤(4)所述剪下初始芽的操作方式为保留芽基部0.2～0.5cm留存于外植体上。
...【技术特征摘要】
1.一种濒危植物金花茶高诱导率外植体制备和初代诱导培养方法，其特征在于：包括外植体获取、外植体灭菌、培养基配制和初代诱导培养，主要操作步骤如下：
2.根据权利要求1所述的一种濒危植物金花茶高诱导率外植体制备和初代诱导培养方法，其特征在于：步骤(1)所述基质杯规格为直径11cm×高15cm，基质为红心土:细沙:泥炭土体积比为8:1:1。
3.根据权利要求1所述的一种濒危植物金花茶高诱导率外植体制备和初代诱导培养方法，其特征在于：步骤(1)所述常规育苗管理为将幼苗置于带遮阴网、可通风的室外育苗大棚内，根据气候，气温太低时在幼苗上方搭建小拱棚覆盖塑料薄膜保温，每2～3天喷淋水1～2次水，每月施n:p:k＝15:10:20的复合肥1次。
4.根据权利要求1所述的一种濒危植物金花茶高诱导率外植体制备和初代诱导培养方法，其特征在于：步骤(1)所述营养液为0.5～1.0mg/ml naa+0.3～0.6mg/ml ggr+50～80mg/l kh2po3+500～800mg/l nh4no3。
5.根据权利要求1所述的一种濒危植物金花茶高诱导率...
【专利技术属性】
技术研发人员：肖玉菲，韦晓娟，刘海龙，钟连香，覃玉凤，黄翠丽，魏秋兰，林东，覃子海，杨德任，杨卓颖，张烨，张晓宁，
申请(专利权)人：广西壮族自治区林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：
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