酶突变体及其在制备异亮氨酰精氨酸中的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，尤其涉及酶突变体及其在制备异亮氨酰精氨酸中的应用。本发明专利技术发现了能够连接L‑异亮氨酸与L‑精氨酸合成异亮氨酰精氨酸的氨基酸连接酶(Uniprot：A0A2W4HG92)。在该酶的基础上进行改造，通过对其催化活性口袋以及其他相关部位氨基酸残基进行突变，最终获得了高催化活性的酶突变体，大大提高了异亮氨酰精氨酸的产量。该方法明显优于化学合成制备工艺，不仅提高了产物的产量，而且在生产成本、能耗、产品品质以及绿色指数方面都表现出突出的优势，适合规模化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，尤其涉及酶突变体及其在制备异亮氨酰精氨酸中的应用。

技术介绍

1、异亮氨酰精氨酸是一种由异亮氨酸(ile，isoleucine)和精氨酸(arg，arginine)通过肽键连接而成的二肽，是鱼肽中的活性成分，能够减轻人体的暂时性疲劳，具有支持心血管、抗炎、改善皮肤健康以及抗菌和抗氧化等特性。

2、目前，异亮氨酰精氨酸生产工艺主要以生物提取法和传统的化学合成为主。其中，天然提取法是通过对牡蛎肉原料依次进行酸处理去除脂肪和多糖、碱处理使蛋白变性、采用中性蛋白酶和木瓜蛋白酶实施酶解及纯化处理而得到的。该路线步骤较多，工艺相对复杂，且提纯过程较为困难，受自然因素影响大，整体收率较低(蔡木易etal.cn112741199a)。化学合成法包括：先用邻苯二甲酸酐保护异亮氨酸氨基，然后利用氯化亚砜活化羧基，最后与三甲基氯硅烷保护的精氨酸缩合得保护的异亮氨酰精氨酸，最后再脱保护。该路线长，整体收率低且过程中容易外消旋。

3、以上所述的生物提取法和传统的化学合成法是目前生产异亮氨酰精氨酸的主要方法，但是这两类方法制备路线长，工艺相本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.L-氨基酸连接酶突变体，其在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中存在F9H、H79D、F81D、A153F、K282D、F322R中任一种单点突变或两种以上的组合突变。

2.根据权利要求1所述的L-氨基酸连接酶突变体，其具有如SEQ ID NO：2～10任一项所示的氨基酸序列。

3.生物材料，其特征在于，包括1)～4)所示的至少一种：

4.根据权利要求3所述的生物材料，其特征在于，所述编码权利要求1或2所述突变体的核酸具有：

5.权利要求1或2所述L氨基酸连接酶突变体的制备方法，包括发酵权利要求3或4所述的生物材料中的宿主，获得含有...

【技术特征摘要】

1.l-氨基酸连接酶突变体，其在seq id no：1所示的氨基酸序列中存在f9h、h79d、f81d、a153f、k282d、f322r中任一种单点突变或两种以上的组合突变。

2.根据权利要求1所述的l-氨基酸连接酶突变体，其具有如seq id no：2～10任一项所示的氨基酸序列。

3.生物材料，其特征在于，包括1)～4)所示的至少一种：

4.根据权利要求3所述的生物材料，其特征在于，所述编码权利要求1或2所述突变体的核酸具有：

5.权利要求1或2所述l氨基酸连接酶突变体的制...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁颖，赵弘，邓雯婷，曹畅，杨惠婷，雷波，于铁妹，潘俊锋，刘建，
申请(专利权)人：深圳瑞德林生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：