【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，尤其涉及tgm2的单克隆抗体以及该抗体的应用。
技术介绍
1、组织谷氨酰胺转移酶2(tissue transglutaminase 2，tgm2)是转谷氨酰酶家族表达最广泛的成员，其分子量为78kda，表现出多种生物功能，与细胞生长、分化和凋亡关系密切。tgm2存在于细胞外基质(extracellular matrix，ecm)、质膜、胞质溶胶、线粒体、循环内体和细胞核中，它的亚细胞定位是其功能的重要决定因素之一。细胞内tgm2被认为在细胞凋亡中起重要作用，而在细胞外基质中，tgm2与ecm的蛋白质纤连蛋白紧密结合。细胞外tgm2与细胞黏附、细胞成瘤、ecm稳定、伤口愈合、受体信号传导、细胞增殖和细胞活力有关。tgm2活性受到ca2+、鸟嘌呤核苷酸和氧化还原信号的调控。tgm2与ca2+相互作用引起构象变化，使tgm2发挥转氨酶活性或细胞信号转导功能。相反，tgm2与gtp或gdp结合形成一种″封闭″构象，阻止其转胺活性。tgm2在不依赖ca2+的情况下发挥酶活性，即通过水解atp和gtp来发挥作用，并作为黏附蛋白分子与多种蛋白质相互作用。tgm2可以参与整合素-纤连蛋白的相互作用，tgm2-fn复合物促进fn原纤维沉积和精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸(arg-gly-asp，rgd)合成肽非依赖性细胞粘附，并维持成骨细胞、骨髓来源的间充质干细胞、和许多肿瘤细胞的存活。tgm2具有蛋白二硫化物异构酶(protein disuloide isomerase，pdi)活性与线粒体依赖性细胞凋亡有关。tgm2发挥特有的丝
2、现有的研究发现，内质网应激、炎症、病毒感染、肝脏损伤和凋亡信号以及癌症等多种病理变化均有tgm2相关基因的参与和调控，但其具体作用机制还不清楚，需要进一步的研究。本专利技术提供的单克隆抗体可以特异性识别连接蛋白tgm2，与其他连接蛋白无交叉反应，具有高亲和力、高灵敏度、高特异性的优点，并提供一种准确检测组织中tgm2蛋白含量的方法，对于tgm2的进一步深入研究有着重大的意义。
技术实现思路
1、本专利技术提供了三种抗tgm2蛋白的抗体，所述抗体是以tgm2不同结合位点多肽(seqid no 7-9)偶联到载体蛋白上作为免疫原，免疫小鼠制备杂交瘤细胞获得。在具体的实施方式中，所述载体蛋白为klh，所述抗体能够特异性识别tgm2蛋白。
2、一方面，本专利技术提供了三种抗tgm2蛋白的抗体，所述抗体具有轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.1-3所示，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no.4-6所示。
3、在一个实施方式中，所述抗体是重组抗体、单克隆抗体或多克隆抗体，优选单克隆抗体。
4、在一个实施方式中，所述抗体是鼠源抗体、人源抗体或嵌合抗体。
5、在优选的实施方式中，所述抗体是小鼠抗体。
6、在一个实施方式中，所述抗体还包括包含选自igg1，igg2，igg3或igg4的igg的重链恒定区。
7、另一方面，本专利技术还提供了产生上述抗体的杂交瘤细胞。
8、另一方面，本专利技术还提供了上述抗体在tgm2蛋白检测中的应用。
9、另一方面，本专利技术还提供了一种双抗体夹心法定量检测tgm2蛋白的方法，所述方法包括利用上述抗体对tgm2蛋白进行检测的步骤。
10、在一个实施方式中，所述方法为间接免疫酶联吸附(elisa)法、蛋白质印迹法(westernblot，wb)、免疫组织化学(immunohistochemistry,ihc)法或免疫荧光法(immunolluorescence，if)。
11、另一方面，本专利技术还提供了一种用于检测tgm2蛋白的试剂，所述试剂包括上述抗体。
12、另一方面，本专利技术还提供了一种检测样品中tgm2蛋白的方法，所述方法包括利用上述抗体对tgm2蛋白进行检测的步骤。
13、在一个实施方式中，所述样品选自人体或其他动物的组织细胞裂解液。
14、本专利技术使用可以诱发机体产生免疫反应tgm2的不同结合位点多肽(seq id no 7-9)偶联至klh作为免疫原免疫小鼠，采用杂交瘤技术经过细胞融合并筛选得到能持续、稳定分泌抗tgm2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，由该细胞株分泌得到单克隆抗体。由三条tgm2的不同结合位点多肽与载体蛋白偶联作为免疫原制备获得的单克隆抗体能够特异性地识别tgm2，分别为多肽1组9个阳性克隆，多肽2组12个阳性克隆，多肽3组18个阳性克隆。复筛筛选出多肽1组4个阳性克隆，多肽2组3个阳性克隆，多肽3组6个阳性克隆，进一步筛选出多肽1组1个克隆，多肽2组1个阳性克隆，多肽3组1个阳性克隆，分别将这几株单克隆抗体分别称之为clone1-2f8，clone 2-1e9，和clone 3-3a5。这几株单克隆抗体具有良好的亲和力，实验表明这几株单克隆抗体与tgm2蛋白结合实验，抗体滴度可达到0.001μg/ml以上，且与其他相关蛋白无明显特异性交叉；且可应用蛋白免疫印迹、免疫荧光、免疫组织化学方法检测体内tgm2蛋白表达及分布。此外，由于clone 2-1e9和clone 3-3a5识别tgm2蛋白的不同的抗原位点，因此可以采用双抗夹心法，分别利用特异识别的两个单克隆抗体对tgm2蛋白进行检测。从而，本专利技术提供一种用于tgm2蛋白检测的方法，可以准确检测样品中tgm2蛋白的含量。
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1.三种识别抗组织谷氨酰胺转移酶2不同位点的抗体或其抗原结合片段，所述抗体具有轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.1-3所示，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.4-6所示。
2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体是单克隆抗体、多克隆抗体或重组抗体。
3.根据权利要求1或2所述的抗体，其特征在于，所述抗体是鼠源抗体、人源抗体或嵌合抗体。
4.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体还包括包含选自IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的IgG的重链恒定区。
5.一种抗TGM2抗体或其抗原结合片段，其中当与TGM2结合时，结合至位于REKLVVRRGQPFWLTLH(SEQ ID NO：7)的氨基酸序列内的表位。
6.一种抗TGM2抗体或其抗原结合片段，其中当与TGM2结合时，结合至位于SRRSSPVYVGRVVSGMVN(SEQ ID NO：8)的氨基酸序列内的表位。
7.一种抗TGM2抗体或其抗原结合片段，其中当与TGM2结合时，结合至位于EV
8.如权利要求5所述的抗体或其片段，其中表位可包含一个或多个氨基酸序列，选自：SEQ ID NO:7的REKLVVRRGQPFWLTLH。
9.如权利要求5所述的抗体或其片段，其中表位由SEQ ID NO:7的REKLVVRRGQPFWLTLH组成。
10.权利要求5的抗体或其片段，其中所述表位包含SEQ ID NO：7的所有十七个氨基酸。
11.如权利要求6所述的抗体或其片段，其中表位可包含一个或多个氨基酸序列，选自：SEQ ID NO：8的SRRSSPVYVGRVVSGMVN。
12.如权利要求6所述的抗体或其片段，其中表位由SEQ ID NO:8的SRRSSPVYVGRVVSGMVN组成。
13.权利要求6的抗体或其片段，其中所述表位包含SEQ ID NO：8的所有十八个氨基酸。
14.如权利要求7所述的抗体或其片段，其中表位可包含一个或多个氨基酸序列，选自：SEQ ID NO：9的EVKVRMDLLPLHMGLHKLVVNF。
15.如权利要求7所述的抗体或其片段，其中表位由SEQ ID NO:9的EVKVRMDLLPLHMGLHKLVVNF组成。
16.如权利要求7的抗体或其片段，其中所述表位包含SEQ ID NO：9的所有二十二个氨基酸。
17.权利要求1-4任一所述的抗体在检测TGM2中的应用。
18.一种检测TGM2的方法，所述方法包括利用权利要求1-4任一所述的抗体对TGM2进行检测的步骤。
19.根据权利要求18所述的抗体，其特征在于，所述方法为间接免疫酶联吸附(ELISA)法,蛋白质印迹法(WesternBlot，WB)，免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)法或免疫荧光法(Immunofluorescence，IF)。
20.一种用于定量检测TGM2的方法，所述方法为双抗体夹心法，其以权利要求1-4所述的一种单克隆抗体为包被抗体，以酶标记的另一种单克隆抗体作为检测抗体。
21.根据权利要求20所述方法包括利用权利要求1-4任一所述的抗体对TGM2进行检测的步骤。
22.一种用于检测TGM2的试剂，所述试剂包括权利要求1-4任一所述的抗体。
23.一种用于检测样品中TGM2的方法，所述方法包括权利要求1-4任一所述的抗体对TGM2的检测步骤。
24.根据权利要求20所述的方法，其特征在于，所述样品选自人体或其他动物的组织。
...【技术特征摘要】
1.三种识别抗组织谷氨酰胺转移酶2不同位点的抗体或其抗原结合片段，所述抗体具有轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.1-3所示，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no.4-6所示。
2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体是单克隆抗体、多克隆抗体或重组抗体。
3.根据权利要求1或2所述的抗体，其特征在于，所述抗体是鼠源抗体、人源抗体或嵌合抗体。
4.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体还包括包含选自igg1，igg2，igg3或igg4的igg的重链恒定区。
5.一种抗tgm2抗体或其抗原结合片段，其中当与tgm2结合时，结合至位于reklvvrrgqpfwltlh(seq id no：7)的氨基酸序列内的表位。
6.一种抗tgm2抗体或其抗原结合片段，其中当与tgm2结合时，结合至位于srrsspvyvgrvvsgmvn(seq id no：8)的氨基酸序列内的表位。
7.一种抗tgm2抗体或其抗原结合片段，其中当与tgm2结合时，结合至位于evkvrmdllplhmglhklvvnf(seq id no：9)的氨基酸序列内的表位。
8.如权利要求5所述的抗体或其片段，其中表位可包含一个或多个氨基酸序列，选自：seq id no:7的reklvvrrgqpfwltlh。
9.如权利要求5所述的抗体或其片段，其中表位由seq id no:7的reklvvrrgqpfwltlh组成。
10.权利要求5的抗体或其片段，其中所述表位包含seq id no：7的所有十七个氨基酸。
11.如权利要求6所述的抗体或其片段，其中表位可包含一个或多个氨基酸序列，选自：seq id no：8的srrsspvyvgrvvsgmvn。
12.如权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：张小刚，张秀华，邵华荣，安阳，王安琪，张艳艳，刘飞，郭新艳，於怀龙，陈勉，
申请(专利权)人：山东省药学科学院，
类型：发明
国别省市：
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