【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及用于序列特异性扩增来自更广泛的核酸序列的群体中的核酸片段亚群的方法。本专利技术明确地仅检测所需的靶序列。本专利技术的方面涉及用于此类方法的核酸构建体。本专利技术描述了用于有效靶向扩增并检测群体中的特定核酸序列的方法。
技术介绍
1、鉴定血液和其他生物样品中的病原体对于有效治疗包括脓毒症的多种疾病状态至关重要。在英国，每小时有5人死于脓毒症，并且全部脓毒症幸存者中有25％的患者遭受永久的、改变人生的后果。早期检测并鉴定细菌感染的病原体对于预防脓毒症的发作和成功治疗脓毒症是必要的。检测并鉴定血源性感染的现有方法包括血液培养和使用抗生素敏感性试验。这些方法包括细胞的培养，这在时间和金钱这两者上都是昂贵的。通常，在可以获得细胞培养结果之前，将发生脓毒性休克。
2、诸如pcr之类可以通过分析病原体的核酸鉴定样品中病原体的现有分子检测方法的应用受到低的总灵敏度水平的限制。当分析人类样品时，由于存在大量的非靶(人类)核酸，因此这尤其是个问题。这些非靶核酸可以抑制靶(病原体)核酸的下游纯化和扩增，导致假阴性结果，或由于非特异性...
【技术保护点】
1.一种用于对来自更广泛的核酸序列的群体中的核酸片段的亚群的多重序列特异性扩增的方法，包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述固定化的引物位于开放微阵列上或位于单独的孔中。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述固定化的引物位于单独的孔中，并且将所述单独的孔同时暴露于相同试剂部分中。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中在扩增之前从所述固相中释放所述液体部分中的所述非固定化的扩增引物。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中通过热循环进行所述扩增。
6.根据权利要求1至4中任一项所述...
【技术特征摘要】
1.一种用于对来自更广泛的核酸序列的群体中的核酸片段的亚群的多重序列特异性扩增的方法，包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述固定化的引物位于开放微阵列上或位于单独的孔中。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述固定化的引物位于单独的孔中，并且将所述单独的孔同时暴露于相同试剂部分中。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中在扩增之前从所述固相中释放所述液体部分中的所述非固定化的扩增引物。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中通过热循环进行所述扩增。
6.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述扩增为等温扩增。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中通过实时查询产生的定位信号进行所述固定化的第二核酸扩增产物的检测。
8.根据权利要求1所述的方法，其中溶液中的两种引物以不同的浓度存在从而产生不对称扩增。
【专利技术属性】
技术研发人员：大卫·艾伦·戴维森，格雷厄姆·沃斯利，贾勒特·基尔帕克，赛缪尔·里德，
申请(专利权)人：DNAE诊断有限公司，
类型：发明
国别省市：
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