【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药及保健食品，具体涉及一种开口箭多糖tcp-1及其制备方法、鉴定方法和应用。
技术介绍
1、溃疡性结肠炎(uc)又称特发性结肠直肠炎、慢性非特异性溃疡性大肠炎，是一种病因不明的特发于直肠和结肠的炎症性肠病。近年来，全球uc的发病率和流行率不断呈现上升趋势，发病高峰年龄多在30～40岁之间，易反复发作，迁延难愈，已成为严重影响病患生存质量的全球性健康问题。uc临床症状主要表现为腹泻、腹痛、黏液脓血便等，一般会导致消瘦、贫血、水电解质紊乱及低蛋白血症，如果控制不好，易有癌变倾向并伴随多种肠外并发症。目前，uc的病因、发病机制未完全明晰，因此，治疗uc仍然是世界范围内的临床治疗挑战。
2、多糖又称多聚糖，是一类广泛存在于动植物与微生物体内的生物信息大分子。天然多糖由于其突出的抗氧化和免疫调节活性，在多种疾病中发挥重要作用，包括肿瘤、抗炎和心血管系统疾病。越来越多的证据表明，植物多糖可以通过影响肠道稳态发挥降血糖、免疫调节、抗炎等多种功效。因此，从天然多糖中寻找潜在的治疗药物有望成为预防和治疗溃疡性结肠炎的有效策略。
3、开口箭(tupistra chinensis baker)为百合科铃兰族的植物，根茎是其药用部位。味苦、辛，性寒，归肺、胃、肝经，清热解毒，祛风除湿，散瘀止痛。临床上用于咽喉肿痛，风湿痹痛，跌打损伤，胃痛，痈肿疮毒，毒蛇、狂犬咬伤等。开口箭的化学成分主要有开口箭中含有甾体、黄酮、蛋白质、多糖等多种成分。以往的对开口箭的活性成分研究主要集中甾体类化合物。多糖作为开口箭的主要活性成分
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的第一个技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种开口箭多糖tcp-1，对溃疡性结肠炎治疗效果显著。
2、为解决上述第一个技术问题，本专利技术的技术方案是：
3、一种开口箭多糖tcp-1，所述开口箭多糖tcp-1由果糖和葡萄糖糖组成，其分子量范围为1000-100000da。
4、优选的，所述开口箭多糖tcp-1的主链由→6)-α-d-glcp-(1→，→1)-β-d-fruf-(2→,→1,6)-β-d-fruf-(2→,→6)-β-d-fruf-(2→和β-d-fruf-(2→组成；支链由→6)-β-d-fruf-(2→和β-d-fruf-(2→组成。
5、专利技术所要解决的第二个技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种开口箭多糖tcp-1的制备方法，得到的开口箭多糖tcp-1对溃疡性结肠炎治疗效果显著。
6、为解决上述第二个技术问题，本专利技术的技术方案是：
7、一种开口箭多糖tcp-1的制备方法，包括以下步骤：
8、s1、剪切
9、将开口箭干燥根茎切片，用水清洗干净、晾干，得开口箭薄片，其中开口箭薄片的尺寸为长3～5cm，直径0.5～2.5cm；
10、s2、水提
11、将步骤s1所得开口箭片加入水中，加热提取，过滤，得提取液；
12、s3、醇沉
13、将步骤s2所得提取液在真空度≤-0.1mpa下浓缩，得浓缩液；向浓缩液中加入无水乙醇，至乙醇体积浓度为a％，静置、分离，得沉淀粗多糖tc，其中10≤a＜100；
14、s4、纯化
15、s4-01、一次纯化
16、将步骤s3所得粗多糖tc进行除蛋白，透析，冻干，得开口箭多糖tc；
17、s4-02、二次纯化
18、将一次纯化后的开口箭多糖tc进行离子交换柱层析，用0～2m的nacl溶液进行梯度洗脱，使用苯酚-硫酸法跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线分别收集糖部分并进行浓缩、冷冻干燥得开口箭多糖tcp；
19、开口箭多糖tcp用水进行溶解、离心，取上清液弃沉淀，将上清液再进行分子筛凝胶柱层析，用水进行洗脱，利用苯酚-硫酸法检测洗脱曲线，根据洗脱曲线收集糖部分并浓缩、冷冻干燥，得开口箭多糖tcp-1。
20、本专利技术采用水提与醇沉法相结合，且高浓度乙醇能将极性大、水溶性好的多糖与极性小、水溶性差的多糖分离，解决了传统水煮法提取多糖导致其后期分离繁杂、困难的问题。
21、优选的，步骤s2中水的添加量为开口箭片重量的6-10倍。
22、优选的，步骤s2中的加热温度为60-80℃，加热提取时间为1-3h，加热提取次数为2-4次。
23、优选的，步骤s3中浓缩温度为40-70℃，静置时间为10-15h。
24、专利技术所要解决的第三个技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种开口箭多糖tcp-1的鉴定方法，成功得出了开口箭多糖tcp-1的结构信息。
25、为解决上述第三个技术问题，本专利技术的技术方案是：
26、一种开口箭多糖tcp-1的鉴定方法，包括以下步骤：
27、(1)取开口箭多糖tcp-1，用tfa酸水解，水解产物高效液相色谱法利用氨基柱rid检测；
28、(2)取开口箭多糖tcp-1，干燥，压片，红外光谱检测；
29、(3)取开口箭多糖tcp-1，甲基化，水解、还原，乙酰化，进行gc-ms检测；
30、(4)取开口箭多糖tcp-1溶于d2o，进行核磁共振分析；
31、(5)取开口箭多糖tcp-1采用刚果红法分析分子构象；
32、(6)取开口箭多糖tcp-1采用扫描电镜分析表面特征。
33、本专利技术以开口箭干燥根茎为原料，采用水提醇沉法分离得到粗多糖，对提取的粗多糖进行脱蛋白，然后利用离子交换层析和凝胶分子筛柱层析方法纯化开口箭粗多糖，首次制备出一种开口箭多糖纯品，对此多糖纯品的理化性质、分子量、单糖组成等进行了系统的分析鉴定，成功得出了开口箭多糖的结构信息，其中开口箭多糖tcp-1为果聚糖，主链由→6)-α-d-glcp-(1→，→1)-β-d-fruf-(2→,→1,6)-β-d-fruf-(2→,→6)-β-d-fruf-(2→和β-d-fruf-(2→组成；支链由→6)-β-d-fruf-(2→和β-d-fruf-(2→组成。
34、优选的，步骤(3)中甲基化为开口箭多糖tcp-1与无水dmso加入反应瓶中，再加入干燥的氢氧化钠，超声20～40min，冰浴条件下，避光下分三次加入碘甲烷，每次冰浴超声20～40min，反应结束后加入蒸馏水分解残留的碘甲烷，并加入氯仿萃取，离心取氯仿层，即得甲基化的开口箭多糖tcp-1；
35、水解、还原为取甲基化的开口箭多糖tcp-1置于具塞试管中，然后加入tf a，在45-60℃恒温油浴下水解25-35min，减压蒸发至干，再重复多次加入甲醇旋干至ph为中性，然后用nabh4在35-45℃下反应本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种开口箭多糖TCP-1，其特征在于：所述开口箭多糖TCP-1由果糖和葡萄糖糖组成，其分子量范围为1000-100000Da。
2.如权利要求1所述的一种开口箭多糖TCP-1，其特征在于：所述开口箭多糖TCP-1的主链由→6)-α-D-Glcp-(1→，→1)-β-D-Fruf-(2→,→1,6)-β-D-Fruf-(2→,→6)-β-D-Fruf-(2→和β-D-Fruf-(2→组成；支链由→6)-β-D-Fr uf-(2→和β-D-Fruf-(2→组成。
3.一种如权利要求1-2中任一项所述的开口箭多糖TCP-1的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.如权利要求3所述的开口箭多糖TCP-1的制备方法，其特征在于：步骤S2中水的添加量为开口箭薄片重量的6-10倍。
5.如权利要求3所述的开口箭多糖TCP-1的制备方法，其特征在于：步骤S2中的加热温度为60-80℃，加热提取时间为1-3h，加热提取次数为2-4次。
6.如权利要求3所述的开口箭多糖TCP-1的制备方法，其特征在于：步骤S3中浓缩温度为40-70℃
7.如权利要求1-6中任一项所述的开口箭多糖TCP-1的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：
8.如权利要求7所述的开口箭多糖TCP-1的鉴定方法，其特征在于：
9.如权利要求1-6中任一项所述的开口箭多糖TCP-1在制备治疗结肠炎药物或保健品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种开口箭多糖tcp-1，其特征在于：所述开口箭多糖tcp-1由果糖和葡萄糖糖组成，其分子量范围为1000-100000da。
2.如权利要求1所述的一种开口箭多糖tcp-1，其特征在于：所述开口箭多糖tcp-1的主链由→6)-α-d-glcp-(1→，→1)-β-d-fruf-(2→,→1,6)-β-d-fruf-(2→,→6)-β-d-fruf-(2→和β-d-fruf-(2→组成；支链由→6)-β-d-fr uf-(2→和β-d-fruf-(2→组成。
3.一种如权利要求1-2中任一项所述的开口箭多糖tcp-1的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.如权利要求3所述的开口箭多糖tcp-1的制备方法，...
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