一种肝素2-O-磺基转移酶高活性突变体的构建方法技术

本发明专利技术公开了一种肝素2‑O‑磺基转移酶高活性突变体的构建方法，属于生物技术领域。1、本发明专利技术在肝素2‑O‑磺基转移酶的N端融合促溶标签，并优化了促溶标签的编码序列，实现了肝素2‑O‑磺基转移酶的活性表达。本发明专利技术还对肝素2‑O‑磺基转移酶进行了突变，获得了具有高稳定性和催化活性的突变体；进一步地，对肝素2‑O‑磺基转移酶进行发酵条件优化，提高了表达量和酶活，增强了其工业生产中的应用潜力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种肝素2-o-磺基转移酶高活性突变体的构建方法，属于生物。

技术介绍

1、肝素(heparin)是一种高度磺酸化的糖胺聚糖，由糖醛酸和葡糖胺构成的重复二糖单元组成。作为最常用的抗凝剂，肝素在预防和治疗血栓等方面发挥关键作用，是现代医疗实践中不可或缺的一部分。它自然合成于肥大细胞的内质网和高尔基体，其生物合成过程始于胞内肝素前体(heparosan)的合成，经一系列酶促修饰后生成具有完全功能的肝素。

2、目前，市场上肝素的供应仍依赖于从动物组织中提取。但面临动物供体生长周期长、跨物种病原体传播风险高等挑战，限制了满足全球日益增长的肝素需求的能力。因此，生物工程策略作为一种新兴的肝素合成方法应运而生，成为传统提取方法的有效替代方案。

3、在肝素修饰的复杂过程中，肝素2-o-磺基转移酶是第二步磺酸化反应的关键酶。它利用磺酸基供体3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸(paps)将磺酸基团转移到己糖醛酸残基的c2位置，形成2-o-磺酸化的idoa2s或glca2s。此限速步骤对后续磺酸化反应至关重要。经肝素2-o-磺基转移酶修饰的肝本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.肝素2-O-磺基转移酶突变体，其特征在于，在SEQ ID NO.1所示亲本的基础上，具有如下一个或多个位点的突变：A85G、A98K、Y102F、H103F、G137A、S144A、Y145F、I160V、I167L、F179Y、R190P、A210D、F221L、L237M、K241I、N243R、F249L、L295P、N314F、F316L、Q323W。

2.根据权利要求1所述的肝素2-O-磺基转移酶突变体，其特征在于，在SEQ ID NO.1所示亲本的基础上，将第98位丙氨酸突变为赖氨酸，和/或将第145位酪氨酸突变为苯丙氨酸。

3.融合蛋白，其特征在...

【技术特征摘要】

1.肝素2-o-磺基转移酶突变体，其特征在于，在seq id no.1所示亲本的基础上，具有如下一个或多个位点的突变：a85g、a98k、y102f、h103f、g137a、s144a、y145f、i160v、i167l、f179y、r190p、a210d、f221l、l237m、k241i、n243r、f249l、l295p、n314f、f316l、q323w。

2.根据权利要求1所述的肝素2-o-磺基转移酶突变体，其特征在于，在seq id no.1所示亲本的基础上，将第98位丙氨酸突变为赖氨酸，和/或将第145位酪氨酸突变为苯丙氨酸。

3.融合蛋白，其特征在于，在权利要求1或2所述肝素2-o-磺基转移酶突变体的n端连接促溶标签构建而成；所述促溶标签包括但不限于sumo、mbp、trxa、set2、nusa、sumo突变体。

4.根据权利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述肝素2-o-磺基转移酶突变体与所述促溶标签之间通过连接肽连接。

5.编码权利要求1或2所述肝素2-o-磺基转移酶突...

【专利技术属性】
技术研发人员：康振，陈坚，陈吴霞，胥睿睿，堵国成，李江华，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：