一种即用型无血清无DMSO的细胞冻存液、制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种即用型无血清无DMSO的细胞冻存液、制备方法及应用，涉及细胞冻存领域，细胞冻存液包括如下组分：乳糖酸钠、氯化钙、氯化镁、磷酸二氢钾、碳酸氢钾、氯化钾、蔗糖、甘露糖、海藻糖、羟乙基淀粉、4‑羟乙基哌嗪乙磺酸、水溶性维生素E、乙二醇。本发明专利技术提供的细胞冻存液具有高效、无外源蛋白和易于使用等优点，冻存后复苏的细胞活性高，并能在复苏后保持其细胞特性；本发明专利技术的细胞冻存液不含血清及其他外源蛋白，避免内毒素、潜伏病毒和批间差异的影响；本发明专利技术的细胞冻存液不含DMSO，对细胞的毒性作用进一步降低，有助于维持细胞特性；本发明专利技术的细胞冻存液无需经过程序降温，可直接放置于‑80℃冰箱保存，使用快捷方便。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞冻存领域，具体涉及一种即用型无血清无dmso的细胞冻存液、制备方法及应用。

技术介绍

1、在细胞培养过程中，需要及时保存原代细胞，避免细胞生物特性随传代次数增加而变化。此外，在细胞采购、运输过程中，某些细胞也需要以冻存的形式来保存。因此，及时方便的冻存细胞在实际工作中显得尤为重要。

2、在细胞冻存相关研究中，有两种主流的观点解释冻存对细胞造成的损伤：(1)冰晶机械地破坏细胞膜，因此在解冻后不可能获得结构完整的细胞；(2)当冷却过程中细胞内形成冰晶时，剩余的液相溶质浓度出现致命的增加。为了减轻这些影响，必须采取相应的保护措施：使用冷冻保护剂和选择合适的冷却和解冻速率。

3、细胞冻存中的冷冻保护剂主要分为渗透保护剂和非渗透保护剂。渗透保护剂可以进入细胞内部，保护细胞免受冷冻中冰晶机械损伤和溶质渗透效应的影响。渗透保护剂在低温下具有高水溶性，可轻易穿过细胞膜和相对小的细胞毒性。非渗透性保护剂不能进入细胞内部，在细胞外发挥作用，通常分子量较大。渗透保护剂和非渗透保护剂协同发挥作用，保护细胞免受冷冻造成的损伤。

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【技术保护点】

1.一种即用型无血清无DMSO的细胞冻存液，其特征在于，每100mL所述的细胞冻存液包括如下用量的组分：2g～6g的乳糖酸钠、0.0003g～0.0008g的氯化钙、0.03g～0.08g的氯化镁、0.08g～0.2g的磷酸二氢钾、0.03g～0.08g的碳酸氢钾、0.1g～0.4g的氯化钾、0.5g～2g的蔗糖、0.2g～0.6g的甘露糖、1g～4g的海藻糖、0.1g～1g的羟乙基淀粉、0.3g～1g的4-羟乙基哌嗪乙磺酸、0.0005g～0.003g的水溶性维生素E、2mL～10mL的乙二醇。

2.根据权利要求1所述一种即用型无血清无DMSO的细胞冻存液，其特征在于，每1...

【技术特征摘要】

1.一种即用型无血清无dmso的细胞冻存液，其特征在于，每100ml所述的细胞冻存液包括如下用量的组分：2g～6g的乳糖酸钠、0.0003g～0.0008g的氯化钙、0.03g～0.08g的氯化镁、0.08g～0.2g的磷酸二氢钾、0.03g～0.08g的碳酸氢钾、0.1g～0.4g的氯化钾、0.5g～2g的蔗糖、0.2g～0.6g的甘露糖、1g～4g的海藻糖、0.1g～1g的羟乙基淀粉、0.3g～1g的4-羟乙基哌嗪乙磺酸、0.0005g～0.003g的水溶性维生素e、2ml～10ml的乙二醇。

2.根据权利要求1所述一种即用型无血清无dmso的细胞冻存液，其特征在于，每100ml所述的细胞冻存液包括如下用量的组分：3g～5g的乳糖酸钠、0.0004g～0.0007g的氯化钙、0.04g～0.07g的氯化镁、0.09g～0.15g的磷酸二氢钾、0.04g～0.07g的碳酸氢钾、0.2g～0.3g的氯化钾、0.6g～0.8g的蔗糖、0.3g～0.5g的甘露糖、1g～3g的海藻糖、0.2g～0.5g的羟乙基淀粉、0.4g～0.8g的4-羟乙基哌嗪乙磺酸、0.001g～0.002g的水溶性维生素e、3ml～8ml的乙二醇。

3.根据权利要求1所述一种即用型无血清无dmso的细胞冻存液，其特征在于，每100ml所述的细胞冻存液包括如下用量的组分：5g的乳糖酸钠、0.0005g的氯...

【专利技术属性】
技术研发人员：程春园，敖章恒，
申请(专利权)人：武汉博士德生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：