基于CRISPR-Cas12a的多重真菌毒素靶标检测方法技术

本发明专利技术提供一种基于CRISPR‑Cas12a的多重真菌毒素靶标检测方法，在不更换Cas12a和crRNA的情况下，利用CRISPR/Cas12a辅助的横向流动分析平台成功实现了OTA和AFB1的多重检测，降低了实验成本。与商业化的胶体金试纸条相比，检测灵敏度提高了1到2个数量级。在无需复杂磁分离步骤下，可直接实现Signal‑on信号模式，减少了复杂实验操作。本研究展示了MC‑LFA策略在资源有限环境中进行食品安全检测的潜力，仅替换适配体序列可以有效地扩大检测靶点范围，使其成为适用于各种分析方案的通用技术，在公共卫生、农业和环境监测等多个领域具备潜在的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及靶标检测，具体涉及一种基于crispr-cas12a的多重真菌毒素靶标检测方法。

技术介绍

1、真菌产生的次级代谢产物——真菌毒素，在小麦、玉米和水稻在内的受污染作物中容易传播。大多数真菌毒素具有致癌、致突变和肝肾毒性作用。赭曲霉毒素a(ochratoxina,ota)和黄曲霉毒素b1(aflatoxin b1,afb1)是谷物中最常见的两种毒素。由于具有热稳定性，它们可以通过食物链和呼吸系统轻易进入人体，对人类和动物健康造成严重危害。许多组织已经为这些污染物在食品中的含量制定了监管阈值。例如，欧盟委员会规定，不同食物中的afb1最大可接受含量范围为2-12μg/kg(视具体食物类型而定)，而未加工谷物的ota最大含量不得超过5μg/kg。欧洲食品安全局规定，ota的可接受每周摄入量为120ng/kg,由于afb1具有遗传毒性，因此无法为其制定可接受的每周摄入量。尽管制定了这些限制，但全球范围内的真菌毒素污染仍在持续。因此，建立一种准确有效的、可同时识别和区分两种毒素的检测方法为确保食品安全至关重要。

2、检测真菌毒素的传统方法包本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于CRISPR-Cas12a的多重真菌毒素靶标检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种基于CRISPR-Cas12a的多重真菌毒素靶标检测方法，其特征在于，所述靶标为OTA或AFB1。

3.根据权利要求2所述的一种基于CRISPR-Cas12a的多重真菌毒素靶标检测方法，其特征在于，步骤1中针对靶标OTA设计的DNA双链开关中，两条DNA单链Probe1和Probe 2的核酸序列分别为：

4.根据权利要求2所述的一种基于CRISPR-Cas12a的多重真菌毒素靶标检测方法，其特征在于，步骤1中针对靶标AFB1设计的D...

【技术特征摘要】

1.一种基于crispr-cas12a的多重真菌毒素靶标检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种基于crispr-cas12a的多重真菌毒素靶标检测方法，其特征在于，所述靶标为ota或afb1。

3.根据权利要求2所述的一种基于crispr-cas12a的多重真菌毒素靶标检测方法，其特征在于，步骤1中针对靶标ota设计的dna双链开关中，两条dna单链probe1和probe 2的核酸序列分别为：

4.根据权利要求2所述的一种基于crispr-cas12a的多重真菌毒素靶标检测方法，其特征在于，步骤1中针对靶标afb1设计的dna双链开关中，两条dna单链probe1和probe 2的核酸序列分别为：

5.根据权利要求1所述的一种基于crispr-cas12a的多重真菌毒素靶标检测方法，其特征在于，制备anti-fam-qds的步骤包括：首先混合羧基水溶性量子点原液与超纯水，随后加入hepes、聚二乙醇3350、edc和anti-fam，混合均匀；然后将混合物进行超速离心来纯化anti-fam-qds；最后添加triton x-100以防止anti-fam-qds的聚集。

6.根据权利要求2所述的一种基于crispr-cas12a的多重真菌毒素靶标检测方法，其特征在于，检测ota对应的h...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦玉岭，吴丽，蒋汶君，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：