一种弧菌外膜蛋白A多表位抗原及其重组抗原的制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种弧菌外膜蛋白A多表位抗原及其重组抗原的制备方法和应用，特点是利用多表位技术设计出灿烂弧菌、副溶血弧菌和溶藻弧菌的外膜蛋白合成的蛋白多表位抗原序列，其氨基酸序列为SEQ ID NO.4所示，其多表位重组抗原的制备方法步骤为：根据多表位抗原氨基酸序列合成多表位基因后并连接到pET‑28a(+)载体上，将含有多表位基因的质粒转化至蛋白表达型感受态细胞中筛选出阳性克隆并进行蛋白表达，利用亲和层析法进行蛋白纯化得到多表位重组抗原，并进一步利用多表位重组抗原制备多表位抗体，以多表位抗体作为标记蛋白，利用微量热泳动技术检测待测样品液中是否含有弧菌，优点是检测速度快且特异性强。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种弧菌外膜蛋白多表位抗原，尤其是涉及一种弧菌外膜蛋白a多表位抗原及其重组抗原的制备方法和应用。

技术介绍

1、弧菌病(vibriosis)是一类由弧菌属细菌引起的细菌性疾病，该类病在全球范围内经常发生，其暴发性流行不仅给海水养殖鱼类、甲壳类及贝类等经济动物的养殖业造成巨大的经济损失，还会导致野生的海水鱼类、甲壳类、贝类和海参的大规模死亡，是海水水产养殖业危害最大的细菌性疾病之一。因此，对弧菌病及其病原进行研究和防治是国内外病害工作者的核心问题。据报道，灿烂弧菌(vibriosplendidus)、溶藻弧菌(vibrioalginolyticus)和副溶血弧菌(vibrioparahaemolyticus)等是对虾、贝类和海参、海水鱼类的主要致病原，常引发体表发炎、肝脏褪色充血等症状，感染刺参可造成其肠道壁变脆、肠腔出现大量黄白色粘液或脓状物的“肠炎”症状。基于水产病原菌的高致病性，快速灵敏的检测和预警海洋病原菌对水产和人类健康势在必行。

2、革兰氏阴性细菌中的外膜蛋白(omp)与多种特性相关，包括膜生物发生、跨细胞膜的运输和信号本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种弧菌外膜蛋白A多表位抗原，其特征在于：利用多表位技术设计出灿烂弧菌、副溶血弧菌和溶藻弧菌的外膜蛋白合成的多表位抗原序列，其氨基酸序列为SEQ ID NO.4所示。

2.一种弧菌外膜蛋白A多表位重组抗原的制备方法，其特征在于具体步骤为：将权利要求1所述的弧菌外膜蛋白A多表位抗原氨基酸序列转换成核苷酸序列，合成弧菌外膜蛋白A基因后克隆到pET-19T克隆载体上，然后酶切连接到pET-28a(+)表达载体上，将含有弧菌外膜蛋白A基因的质粒转化至蛋白表达型感受态细胞BL21(DE3)中，筛选出阳性克隆并进行蛋白表达，利用亲和层析法进行蛋白纯化得到弧菌外膜蛋白A多表位重组抗原。...

【技术特征摘要】

1.一种弧菌外膜蛋白a多表位抗原，其特征在于：利用多表位技术设计出灿烂弧菌、副溶血弧菌和溶藻弧菌的外膜蛋白合成的多表位抗原序列，其氨基酸序列为seq id no.4所示。

2.一种弧菌外膜蛋白a多表位重组抗原的制备方法，其特征在于具体步骤为：将权利要求1所述的弧菌外膜蛋白a多表位抗原氨基酸序列转换成核苷酸序列，合成弧菌外膜蛋白a基因后克隆到pet-19t克隆载体上，然后酶切连接到pet-28a(+)表达载体上，将含有弧菌外膜蛋白a基因的质粒转化至蛋白表达型感受态细胞bl21(de3)中，筛选出阳性克隆并进行蛋白表达，利用亲和层析法进行蛋白纯化得到弧菌外膜蛋白a多表位重组抗原。

3.根据权利要求2所述的一种弧菌外膜蛋白a多表位重组抗原的制备方法，其特征在于具体步骤如下：将权利要求1所述的弧菌外膜蛋白a多表位抗原氨基酸序列转换成核苷酸序列，合成弧菌外膜蛋白a基因后克隆到pet-28a(+)克隆载体上，然后酶切连接到pet-28a(+)表达载体上，将含有弧菌外膜蛋白a基因的质粒转化至蛋白表达型感受态细胞bl21(de3)中筛选出阳性克隆，将阳性克隆接于大肠杆菌液体培养基中在37℃、120r/min条件下培养至菌液od600为0.4～0.6时，加入终浓度为0.5mm的iptg 37℃诱导5h；诱导结束后，以10000r/min的转速离心5min，弃掉大肠杆菌液体培养基，菌体用10倍缓冲溶液重悬后，用纳米高压均...

【专利技术属性】
技术研发人员：张真，李成华，苏秀榕，吕志猛，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：