一种分离纤细裸藻鞭毛微丝与轴丝的方法技术

本发明专利技术公开了一种分离纤细裸藻鞭毛微丝与轴丝的方法，涉及微生物结构研究技术领域。本发明专利技术提供的方法，将纤细裸藻用第一缓冲溶液重悬后，加入鞭毛脱落溶液，进行鞭毛脱落处理；使用第一差速离心的方式分离鞭毛，得到粗提纤细裸藻鞭毛；对所述粗提纤细裸藻鞭毛用第二缓冲溶液重悬后，经第一离心，收集上清；向所述上清中加入去垢剂抽提，经第二离心，回收沉淀，得到纤细裸藻鞭毛轴丝与微丝的混合物；将所述纤细裸藻鞭毛轴丝与微丝的混合物用第三缓冲溶液重悬，加入辅酶孵育，使用第二差速离心的方式分离得到纤细裸藻鞭毛的轴丝以及纤细裸藻鞭毛的微丝。本发明专利技术通过对纤细裸藻鞭毛的纯化条件进行优化，适用于在小量纯化基础上，获得纯度高且完整的鞭毛成分。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物结构研究，尤其涉及一种分离纤细裸藻鞭毛微丝与轴丝的方法。

技术介绍

1、微生物鞭毛是微生物的一种特殊结构，它在微生物的运动、感染与免疫以及分类鉴定等方面发挥着重要作用。微生物鞭毛的结构生物学相关研究是当下结构生物研究的热点，鞭毛的相关研究可以帮助人们理解病原体等微生物的运动机制和宿主感染过程；利用鞭毛细菌的趋化性，用于检测环境中的特定化学物质；通过研究鞭毛的结构和运动机制，为开发微型机器人和纳米技术提供灵感。

2、目前，针对微生物鞭毛的结构生物学研究主要集中在大肠杆菌等细菌、莱茵衣藻等植物绿藻中，对原生生物中的鞭毛研究较少。根据专利技术人了解，目前针对原生生物鞭毛的研究主要集中在纤细裸藻的全鞭毛整体结构状态，通过使用高含量纤细裸藻的样品进行相关分离，无法对鞭毛中不同组分进行精准且完整的分离，不利于使用单颗粒冷冻电镜技术对原生生物鞭毛进行高分辨率结构生物学研究。

技术实现思路

1、本专利技术所要解决的技术问题是现有技术中研究使用的纤细裸藻体量较大，难以实现对鞭毛中不同组分的精准且本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种分离纤细裸藻鞭毛微丝与轴丝的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的分离纤细裸藻鞭毛微丝与轴丝的方法，其特征在于，所述去垢剂包括NP-40、TritonX-100、DDM中的至少一种。

3.如权利要求1所述的分离纤细裸藻鞭毛微丝与轴丝的方法，其特征在于，所述步骤S3中，加入的去垢剂浓度为0.1～2wt％，在0～4摄氏度下抽提0.5～1.5小时。

4.如权利要求1所述的分离纤细裸藻鞭毛微丝与轴丝的方法，其特征在于，所述步骤S4中，加入的辅酶为三磷酸腺苷粉末，终浓度为8～15mM，在室温下孵育0.5～1.5小时。

5.如...

【技术特征摘要】

1.一种分离纤细裸藻鞭毛微丝与轴丝的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的分离纤细裸藻鞭毛微丝与轴丝的方法，其特征在于，所述去垢剂包括np-40、tritonx-100、ddm中的至少一种。

3.如权利要求1所述的分离纤细裸藻鞭毛微丝与轴丝的方法，其特征在于，所述步骤s3中，加入的去垢剂浓度为0.1～2wt％，在0～4摄氏度下抽提0.5～1.5小时。

4.如权利要求1所述的分离纤细裸藻鞭毛微丝与轴丝的方法，其特征在于，所述步骤s4中，加入的辅酶为三磷酸腺苷粉末，终浓度为8～15mm，在室温下孵育0.5～1.5小时。

5.如权利要求1～4任一项所述的分离纤细裸藻鞭毛微丝与轴丝的方法，其特征在于，所述步骤s1之前，还包括：取3～4l培养至少5天的纤细裸藻培养物，离心，得到纤细裸藻。

6.如权利要求5所述的分离纤细裸藻鞭毛微丝与轴丝的方法，其特征在于，所述第一缓冲溶液为乙酸钠溶液，浓度为20～30mm，ph为6.5～7.5，用量为30～50ml；所述第二缓冲溶液为三羟甲基氨基甲烷溶液，浓度为30～50mm，ph为7.5～8.5，用量为300～800μl。

7.如权利要求5所述的分离纤细裸藻鞭毛微丝与轴丝的方法，其特征在于，所述第三缓冲溶液含有25～30mm 4-羟乙基哌嗪乙磺酸、3～8mm氯化镁、0...

【专利技术属性】
技术研发人员：谷金科，张铭晖，吴博雯，彭华才，李裕丹，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：